Chuẩn bị nuôi cấy tế bào thần kinh sơ cấp

Các quy trình thử nghiệm liên quan đến thu hoạch mô động vật đã được văn phòng thú y của Canton Basel-Stadt phê duyệt theo luật liên bang Thụy Sĩ về phúc lợi động vật và được thực hiện theo các hướng dẫn đã được phê duyệt. Chip HD-MEA hoặc nắp đậy thủy tinh được khử trùng trong ethanol 70% trong 60 phút và rửa bằng nước khử ion vô trùng dưới luồng không khí nhiều tầng. Sau đó, dãy điện cực hoặc các lá kính phủ được xử lý bằng 10 µl poly(ethyleneimine) (Sigma-Aldrich) 0.05% (v/v) trong dung dịch đệm borat (Thermo Fisher Scientific) trong 40 phút ở nhiệt độ phòng và rửa bằng nước khử ion, sau đó bằng cách ủ với 8 µl 0.02 mg ml^-1 laminin (Sigma-Aldrich) trong môi trường cơ bản thần kinh (NB) (Gibco) trong 30 phút ở 37°C. Phôi chuột Wistar E-18 được mổ xẻ trong HBSS (Gibco) lạnh như băng để thu hoạch vỏ não của chúng, sau đó chúng được phân tách trong 0.25% trypsin–EDTA (Gibco). Các tế bào vỏ não đã phân tách được nghiền nhỏ và lọc qua rây 0.45 µm để thu được các tế bào đơn lẻ. Mật độ tế bào đã được ước tính và 10 µl của 3,000 tế bào µl^-1 dung dịch được mạ lên mảng điện cực. Các tế bào được phép gắn vào mảng bằng cách ủ chip ở 37 ° C trong 40 phút trước khi thêm 2 ml môi trường mạ NB. Môi trường mạ NB được chuẩn bị bằng cách thêm 50 ml huyết thanh ngựa (HyClone), 1.25 ml glutamax (Invitrogen) và 10 ml B-27 (Invitrogen) vào 450 ml Neurobasal (Gibco). Chip HD-MEA được giữ bên trong tủ nuôi cấy tế bào ở nhiệt độ 37°C và 5% CO₂. Sau 3 ngày, các tế bào được nuôi cấy trong môi trường mạ NB không có huyết thanh lên đến DIV 20 bằng cách trao đổi 50% môi trường nuôi cấy với môi trường mạ NB tươi 3 ngày một lần. Tất cả các thí nghiệm, ngoại trừ dữ liệu được hiển thị trong Hình. 1i, được tiến hành giữa DIV 14 và 16 vì các tế bào biểu hiện các tính chất cơ học khác nhau khi phát triển¹¹. Các thí nghiệm cho dữ liệu được hiển thị trong Hình. 1i được thu thập trong khoảng thời gian từ DIV 22 đến 24, khi mạng nơ-ron cho thấy hoạt động bùng nổ đồng bộ.

Chuẩn bị lát tiểu não

Chuột hoang dã (ngày sau sinh 14 C57BL/6Rj, Phòng thí nghiệm Janvier) bị chặt đầu khi gây mê bằng isoflurane; bộ não của họ đã được loại bỏ và ngâm trong bọt khí carbogen lạnh như băng (95% O₂ + 5% COXNUMX₂) dung dịch dịch não tủy nhân tạo (aCSF). Các lát cắt tiểu não dọc ~Thu được 350 µm bằng máy rung (VT1200S, Leica). Tất cả các lát cắt được duy trì ở nhiệt độ phòng trong aCSF cho đến khi sử dụng. aCSF bao gồm 125 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 2 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂, 25 mM glucose, 1.25 mM NaH₂PO₄ và 25mM NaHCO₃. Sau đó, mảng điện cực của chip HD-MEA được xử lý bằng 10 µl poly(ethyleneimine) (Sigma-Aldrich) 0.05% (v/v) trong dung dịch đệm borat (Thermo Fisher Scientific) trong 40 phút ở nhiệt độ phòng và rửa bằng dung dịch khử ion. nước, sau đó ủ với 8 µl 0.02 mg ml^-1 laminin (Sigma-Aldrich) trong môi trường Neurobasal (Gibco) trong 30 phút ở 37°C. Lượng laminin dư thừa sau khi ủ được hút ra ngoài và để mảng khô. Sau đó, lát tiểu não được đặt nhẹ nhàng lên dãy điện cực bằng cách sử dụng đầu pipet đã cắt để tránh hư hỏng do lực cắt gây ra trong quá trình hút ống (Hình bổ sung. 13). Một cây đàn hạc tùy chỉnh 2 mm được đặt trên lát mô để cố định lát mô. Sau đó, các lát mô được ngâm trong aCSF bằng cách thêm nhẹ nhàng từng giọt. Sau đó, lát mô cố định được ngâm trong aCSF được phép bám vào mảng điện cực trong 30 phút. Ngay trước khi ghi, đàn hạc đã được tháo ra và đầu AFM được gắn vào chip HD-MEA. Mô được tưới máu liên tục bằng aCSF sủi bọt carbogen để duy trì khả năng sống và hoạt động của tế bào.

Thiết lập HD-MEA

Chip HD-MEA dựa trên oxit kim loại bổ sung (CMOS) bổ sung có 26,400 điện cực (bước 17.5 µm) trong vùng cảm biến tổng thể là 3.85 × 2.10 mm² đã được sử dụng²⁵. Các con chip được chế tạo trong một xưởng đúc thương mại và được xử lý sau và đóng gói trong nhà (Hình bổ sung. 1b). Các vòng polycarbonate trong suốt (GB Plex) có đường kính 4 cm được dán vào chip và các liên kết dây được bọc bằng nhựa epoxy tối màu tương thích sinh học (EPO-TEK 353 ND). Lớp phủ màu đen bạch kim của các điện cực được mạ điện để giảm trở kháng điện cực và cải thiện đặc tính tín hiệu trên tạp âm (Hình bổ sung. 1c). Bạn có thể mua phiên bản thương mại của hệ thống HD-MEA được phát triển tùy chỉnh của chúng tôi (kiểu MaxOne) từ MaxWell Biosystems.

Giá đỡ mẫu và bộ gia nhiệt sân khấu

Bộ gia nhiệt mẫu dựa trên nhiệt điện Peltier, có đầu dò nhiệt độ để phản hồi vòng kín, được điều khiển bởi bộ điều khiển nhiệt độ chế tạo tại nhà để duy trì mẫu ở 37°C. Bộ gia nhiệt mẫu được căn chỉnh với miếng dẫn nhiệt trên chip HD-MEA. Sau đó, các con chip được gắn vào giá đỡ mẫu và khóa vào vị trí bằng chốt lò xo của giá đỡ. Prusa I3 MK3S+ đã được sử dụng để in 3D các giá đỡ ống tiêm tiết kiệm để thiết lập hệ thống tưới máu được gắn vào giá đỡ mẫu. Toàn bộ thiết lập được gắn vào một thiết bị tùy chỉnh x,y giai đoạn áp điện thông qua một tấm đế.

x,y sân khấu áp điện

Hai giai đoạn áp điện tuyến tính (sê-ri Xeryon XLS-1) với độ phân giải bộ mã hóa 5nm được gắn vuông góc với nhau (Hình bổ sung. 1a). Các giai đoạn tuyến tính được điều khiển bởi bộ điều khiển đa trục Xeryon XD-M được kết nối với giao diện người dùng dựa trên LabVIEW. Điện cực trên cùng bên trái của chip HD-MEA đã được đăng ký làm nguồn gốc của hệ tọa độ và tọa độ điện cực với các nơ-ron quan tâm được trích xuất từ ​​giao diện người dùng MaxWell Biosystems. Các tọa độ này sau đó được đưa đến bộ điều khiển XD-M bằng cách sử dụng các tập lệnh tùy chỉnh để dễ dàng định vị các nơ-ron dưới công cụ đúc hẫng AFM.

Kính hiển vi huỳnh quang khoảng cách làm việc dài

Một kính hiển vi quang học (Nikon SMZ 25) với thấu kính thu phóng có thể điều chỉnh 15.75× và vật kính 1× (Nikon, MNH55100 P2-SHR PlanApo 1X; khẩu độ số, 0.156) đã được căn chỉnh với thiết lập như đã đề cập trong văn bản chính. Đèn chiếu sáng đi-ốt phát quang (LED) có thể điều khiển bằng TTL (CoolLED PE 300^{cực đoan}) đã được sử dụng làm nguồn sáng cho hình ảnh không có bộ lọc kích thích/phát xạ. Bộ tách chùm ba dải thông (F66-412, AHF Analysentechnik) đã được sử dụng để lọc ánh sáng kích thích phản xạ từ chip HD-MEA. Một máy ảnh mảng CMOS lớn (Nikon DS-QI2) với 4,908 × 3,264 pixel (kích thước pixel, 7.3 × 7.3 µm²) được gắn vào kính hiển vi bằng ống kính máy chiếu gắn trên 2.5 × f cho phép lấy mẫu lên tới 45 khung hình / giây với độ phóng đại cuối cùng là ~40× và độ phân giải 0.46 µm mỗi pixel.

AFM

Đầu AFM (Catalyst, Bruker) đã được gắn và căn chỉnh theo cách thiết lập như đã đề cập trong phần văn bản chính. Một máy quét Piezo 15 µm trên đầu được sử dụng để thu thập tất cả các đường cong lực-độ dịch chuyển và lực-thời gian, trong khi một Piezo 150 µm được sử dụng để định vị công xôn trên tế bào thần kinh. Dữ liệu được thu thập và xuất sang tệp .txt bằng phần mềm AFM (Nanscope v.9.2, Bruker). Dữ liệu được phân tích và vẽ bằng các tập lệnh Python. Các hạt silica có đường kính 5 μm (Công nghệ sinh học Kisker) được dán vào đầu tự do của các công cụ đúc hẫng siêu nhỏ không đầu (CSC-37 hoặc 38, Micromash HQ) bằng keo cực tím (Dymax) và được xử lý bằng tia cực tím trong 20 phút. Công cụ đúc hẫng đính cườm được làm sạch trong 5 phút bằng máy làm sạch plasma (Harrick Plasma), sau đó gắn vào giá đỡ đầu dò chất lỏng có cửa sổ sapphire 2 mm và được hiệu chỉnh bằng phương pháp nhiễu nhiệt⁴⁸.

AFM tương ứng, HD-MEA và kính hiển vi quang học

AFM, HD-MEA và kính hiển vi quang học được căn chỉnh như hình (Hình 2). 1a). Ánh sáng huỳnh quang từ tế bào thần kinh trên chip HD-MEA được thu thập qua cửa sổ sapphire trong giá đỡ đúc hẫng AFM và truyền đến kính hiển vi quang học. Hình ảnh huỳnh quang của các nơ-ron trên chip HD-MEA được thu thập tuần tự ở các vùng quan tâm, được ghép và đăng ký trên giao diện người dùng Maxwell MEA để định vị các nơ-ron trên chip HD-MEA (Hình bổ sung. 2a–d). Các x,y tọa độ của các nơ-ron quan tâm sau đó được đưa vào x,y giai đoạn thông qua các tập lệnh LabVIEW, do đó đặt công cụ đúc hẫng AFM ở các vị trí mong muốn với ~Độ chính xác 5nm. Toàn bộ thiết lập được lắp đặt trên một bàn cách ly giảm chấn và đặt trong buồng kiểm soát nhiệt độ, chống ồn để giảm tiếng ồn cơ học và hiện tượng trôi nhiệt.

Đồng bộ hóa TTL

Các xung TTL từ DS-Qi2 được trích xuất bằng cách sử dụng đầu nối tự chế có chân bốn cực 3.5 inch, một bên là phích cắm mini và một đầu nối cái 24 AWG (RND 255-00015, Distrelec) ở bên kia. Chân 1 là nối đất và chân 4 (EXP_TMG) nhận được 2.4 V ở mức HI (cao) khi hoạt động trực tiếp theo thời gian phơi sáng đã đặt. Xung âm 0–5 V được trích ra từ kênh đầu ra 1 của bảng mặt trước của bộ điều khiển AFM (Bruker Nanoscope V) thông qua một đầu nối tự chế với một chân đực BNC tiêu chuẩn ở một bên và một đầu nối 24 AWG cái (RND 255). -00015, Distrelec) ở phía bên kia. Các tín hiệu được trích xuất từ ​​cả máy ảnh và AFM sau đó được chuyển đến chân 2 và 8 của một bộ ghép quang tốc độ cao. Sau đó, các tín hiệu được gửi đến hệ thống thu thập dữ liệu HD-MEA thông qua mảng cổng có thể lập trình trường, cung cấp dấu thời gian chính xác của các sự kiện được phát hiện bởi AFM và kính hiển vi quang học trên bản ghi tệp thô của dữ liệu HD-MEA được thu thập ở tần số 20 kHz.

Giao thức và phép đo theo dõi độ cứng

Mô đun Young rõ ràng được tính toán từ trung bình của năm đường cong dịch chuyển lực được thu thập trên tế bào thần kinh. Sau đó, chúng tôi đợi trong 30 giây để đảm bảo rằng không có thay đổi cơ học nào do phép đo gây ra trong các tế bào thần kinh và thu thập lại năm đường cong dịch chuyển lực (Hình XNUMX). 2a), được chúng tôi gắn nhãn là một chu kỳ đo và được biểu thị bằng một dấu chấm (Hình 2). 2b). Chúng tôi lặp lại chu kỳ đo này tối đa 5 phút trên một nơ-ron và chuyển sang nơ-ron tiếp theo trong mạng. Sáu mươi phút sau lần đo đầu tiên trên nơ-ron đầu tiên, chúng tôi quay trở lại cùng một nơ-ron đó và chu kỳ đo được lặp lại. Các phép đo bao gồm một chu kỳ theo dõi quy mô thời gian dài. Chu kỳ theo dõi quy mô thời gian dài này được lặp lại ba lần (Hình XNUMX). 2c). Để đo độ cứng của tế bào thần kinh, trước tiên chúng tôi ghi lại hoạt động điện sinh lý của tế bào thần kinh trong 5 phút và sau đó xác định hai tế bào thần kinh cách ly tốt trên mỗi tế bào thần kinh và thu thập các đường cong dịch chuyển lực trên chúng. Các đường cong chuyển vị của lực được thu thập bằng cách sử dụng microcantilevers CSC-38 (hằng số lò xo danh nghĩa, ~0.02 N·m^-1) có các hạt có đường kính 5 μm như đã đề cập ở trên. Một lực tối đa 700 pN trên soma và 400 pN trên tế bào thần kinh đã được sử dụng để thu thập các đường cong khoảng cách lực (Hình bổ sung. 14a, b). Đối với tất cả các phép đo, vận tốc đầu tip được giữ không đổi ở mức 10 µm s^-1. Điểm tiếp xúc được xác định từ đường cong lực-chuyển vị tiếp cận là x đánh chặn ở giá trị lực, cao hơn năm lần so với độ lệch chuẩn của tiếng ồn cơ bản, sau đó là giám tuyển thủ công. Độ sâu vết lõm được tính bằng giá trị dịch chuyển tại điểm tiếp xúc sau khi trừ đi độ lệch của công xôn và đặt giá trị dịch chuyển ở lực cực đại về 0 trong đường cong chuyển vị lực-lực (Hình bổ sung. 14c). Độ sâu vết lõm đối với cùng một lực cực đại nhất định sẽ thay đổi từ soma này sang soma khác tùy thuộc vào độ cứng của nó. Do đó, chúng tôi đã đặt giới hạn độ sâu thụt đầu dòng là 750 nm. Trong các đường cong chuyển vị lực, tất cả các giá trị lực mà giá trị chuyển vị tương ứng vượt quá giới hạn độ sâu vết lõm đều bị loại bỏ. Mô đun Young biểu kiến ​​được tính toán từ những đường cong mà mô hình Hertz dành cho vật bị lõm hình cầu có nửa không gian đàn hồi⁴⁹ được trang bị bằng mã tùy chỉnh trong Python.

Các giá trị mô đun Young được đo trong nghiên cứu của chúng tôi về khối tế bào thần kinh nằm trong phạm vi tương đương với các báo cáo trước đó^10,11. Tuy nhiên, mô đun tế bào thần kinh của Young thấp hơn so với giá trị được báo cáo, trong khi chúng vẫn ở mức độ lớn tương đương. Sự thiên vị này có thể xuất phát từ sự lựa chọn của chúng tôi để đo hai tế bào thần kinh cơ bản dày nhất của tế bào thần kinh, thường mềm hơn. Để đo độ cứng của các khối tế bào thần kinh trong quá trình bùng nổ và IBI, chúng tôi đã thu thập các đường cong dịch chuyển lực ở tần số 5 Hz. Quá trình này được lặp lại nhiều lần cho mỗi soma và độ cứng trung bình của soma trong thời gian bùng nổ và trong IBI đã được tính toán. Trong khi các vụ nổ thường xuất hiện theo kiểu nhịp nhàng (Hình XNUMX). 2h), rất khó để dự đoán đối với các tế bào thần kinh được nuôi cấy khi một tế bào thần kinh đơn lẻ trải qua quá trình bùng nổ. Để thu thập ít nhất hai đường cong dịch chuyển lực trong các giai đoạn bùng nổ hoặc IBI, đồng thời giảm thiểu số lần đầu dò tiếp xúc với nơ-ron, chúng tôi đã thụt vào nơ-ron 5 lần s^-1.

Giao thức nén tĩnh

Một hạt có đường kính 5 µm, được dán vào một công xôn siêu nhỏ AFM không đầu (CSC-37; hằng số lò xo danh nghĩa, ~0.8 N·m^-1), được định vị phía trên soma. Hạt được hạ xuống soma cho đến khi đạt được lực điểm đặt cần thiết để tác dụng 0.1 kPa hoặc 5 kPa và giữ tiếp xúc trong 60 giây bằng cách sử dụng phản hồi có chiều cao không đổi trước khi rút hạt lại (Hình XNUMX). 5b). Đường cong lực-thời gian được ghi ở tốc độ lấy mẫu 500 kHz cho thấy cả sự dịch chuyển theo chiều dọc của đầu AFM và phản ứng lực của soma. Chiều cao trung bình của soma của tế bào thần kinh vỏ não chuột là ~8 µm (Hình bổ sung. 11a).

Hình ảnh canxi chức năng

Cảm biến canxi được mã hóa di truyền được biểu hiện trong tế bào thần kinh bằng cách sử dụng virus liên quan đến adeno (AAV). AAV1-EF1a-GCaMP6 (1.8 × 10¹³ bộ gen virus ml^-1) đã được sử dụng với bội số lây nhiễm là 5.0 × 10⁴ để thể hiện GCaMP6. Tế bào thần kinh bị nhiễm DIV 3; biểu hiện thường thấy ở DIV 5–9.

Phân tích hình ảnh canxi chức năng của tế bào thần kinh được kích thích cơ học

Đường cong cường độ huỳnh quang trung bình ΔI/I của đường cong GCaMP6 được tính là tín hiệu trung bình trên toàn bộ hình ảnh so với đường cơ sở của hình ảnh. Việc phát hiện cực đại trong tín hiệu được thực hiện bằng cách tìm cực đại cục bộ trong cửa sổ 3 giây. Một sự kiện được đánh dấu là sự khởi đầu của phản ứng thần kinh khi biên độ tín hiệu canxi đạt 10% giá trị đỉnh. Dữ liệu từ 2.5 giây trước và 10 giây sau khi bắt đầu đỉnh phản hồi (t = 0) đã được vẽ.

Bản ghi HD-MEA

Giao diện người dùng MaxWell Biosystem (MaxLab Live v.22.13) đã được sử dụng để ghi lại dữ liệu. Hình ảnh huỳnh quang toàn chip đã được đăng ký trên giao diện người dùng (Hình bổ sung. 2c). Các tế bào thần kinh quan tâm đã được xác định từ các gai canxi và hoạt động tăng vọt (điện thế hoạt động) được lấy từ các biểu đồ raster trực tiếp trên giao diện người dùng. Sau khi xác định được nơ-ron quan tâm, 512 điện cực xung quanh nơ-ron này theo cấu hình hình chữ nhật sẽ được chuyển đến đầu đọc. Sau khi định vị công cụ đúc hẫng AFM trên nơ-ron, các kênh được bù năm lần để bù nhiễu từ tia laser hồng ngoại được AFM sử dụng để phát hiện độ lệch của công cụ đúc hẫng trước khi bắt đầu ghi. Mức tăng 512 và bộ lọc thông cao có mức cắt ở 300 Hz đã được sử dụng cho tất cả các bản ghi. Để cải thiện hiệu suất của các thuật toán sắp xếp tăng đột biến trong Hình. 5, điện thế hoạt động của tế bào thần kinh được ghi lại 2.5 phút trước và sau khi kích thích cơ học.

Phân tích dữ liệu HD-MEA

Tất cả dữ liệu HD-MEA được thu thập đều được xử lý thông qua các tập lệnh tùy chỉnh dựa trên giao diện Spike⁵⁰. Tóm lại, các bản ghi ngoại bào được lọc và sắp xếp tăng đột biến bằng Kilosort2, sau đó là quản lý thủ công tất cả các bản ghi. Ngưỡng vi phạm khoảng thời gian giữa các đợt tăng đột biến là 0.5 và ngưỡng tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu là 5.0 đã được sử dụng để quản lý. Độ tương tự mẫu, biểu đồ tương quan tự động và biểu đồ tương quan chéo được sử dụng để đánh giá chất lượng đơn vị. Các đặc điểm dạng sóng như độ rộng nửa độ rộng và độ dốc tái phân cực đã được trích xuất cho các đơn vị được sắp xếp tăng đột biến cho các kỷ nguyên tương ứng với các tập lệnh Python sử dụng các hàm từ Spikeinterface (Hình bổ sung XNUMX). 12a–i). Những thay đổi tương đối về đặc điểm dạng sóng trên tất cả các điện cực trong phạm vi dấu chân ngoại bào của tế bào thần kinh có được bằng cách chia giá trị đặc điểm dạng sóng trung bình của tất cả các xung trong quá trình nén cơ học cho đặc điểm dạng sóng trung bình của tất cả các xung trước khi nén. Tốc độ bắn trung bình và khoảng thời gian giữa các đợt tăng đột biến được tính toán từ các chuỗi tăng đột biến được trích xuất bằng bộ công cụ phân tích điện sinh lý Voi 0.11.2⁵¹. Tốc độ bắn trung bình đối với dữ liệu tương quan độ cứng được tính bằng cách đặt các gai vào thùng 30 giây để khớp với các điểm thời gian của giá trị độ cứng. Tốc độ bắn trung bình của giao thức nén được tính bằng cách đặt các xung vào ba thùng trước, trong và sau khi nén.

Kính hiển vi kết hợp AFM và đồng tiêu

Hình ảnh đồng tiêu tua nhanh thời gian được thực hiện trên kính hiển vi đồng tiêu quét laser đảo ngược (Observer Z1, LSM 700; Zeiss) được trang bị vật kính ngâm nước 25 × / 0.8 LCI PlanApo (Zeiss). Một AFM (CellHesion 200; Dụng cụ JPK) đã được gắn trên kính hiển vi đồng tiêu. Các giao thức nén cơ học được thực thi bằng phần mềm JPK CellHesion. Để kích thích cơ học, AFM được sử dụng để tiếp cận công xôn bằng hạt trên tế bào ở tốc độ 0.1, 1, 10 hoặc 100 μm s^-1 cho đến khi đạt đến lực điểm đặt, và sau đó ngay lập tức rút lại với tốc độ tương tự như khi tiếp cận. Đối với các thí nghiệm xác định lực ngưỡng để kích thích tế bào thần kinh một cách cơ học, lực điểm đặt áp dụng được tăng dần từ 50 lên 400 nN với khoảng tăng 50 nN và khoảng thời gian 20 giây (Hình bổ sung. 6). Lực điểm đặt của hạt tiếp cận được tăng dần cho đến khi ghi lại phản ứng thần kinh. Sau khi kích thích thành công tế bào thần kinh, công cụ đúc hẫng được rút lại và một tế bào thần kinh mới được chọn để kích thích.

Phân tích thống kê

Tất cả dữ liệu hiển thị các thuộc tính dạng sóng đã được kiểm tra tính quy phạm bằng thử nghiệm Shapiro–Wilk và Q–Q lô. Tất cả các nhóm dữ liệu thường không được phân phối và là các nhóm dữ liệu phụ thuộc. Vì vậy, chúng tôi đã sử dụng bài kiểm tra xếp hạng có chữ ký của Wilcoxon. Giả thuyết không là không có sự khác biệt về trung vị giữa các phân phối được so sánh theo cặp. P giá trị > 0.05 được coi là không đáng kể. Các đặc điểm dạng sóng được trích xuất từ ​​dạng sóng trung bình của mỗi nơ-ron thu được từ n > 5,000 gai. Tất cả dữ liệu cho thấy tốc độ bắn trung bình được so sánh với bài kiểm tra cấp bậc có chữ ký của Wilcoxon từ n > 10,000 gai. Các nhóm dữ liệu AFM được so sánh bằng cách sử dụng mô hình Mann–Whitney hai đuôi U-kiểm tra. P giá trị cho mỗi so sánh được đề cập trong chú thích hình. Tương quan Pearson được sử dụng để xác định mối tương quan tuyến tính về độ cứng và giá trị tốc độ bắn trung bình. Không có phương pháp thống kê nào được sử dụng để xác định trước cỡ mẫu. Việc thu thập và phân tích dữ liệu không được thực hiện mù quáng với các điều kiện của thí nghiệm.

Tóm tắt báo cáo

Thông tin thêm về thiết kế nghiên cứu có sẵn trong Tóm tắt báo cáo danh mục đầu tư tự nhiên liên kết đến bài viết này.

• Phân phối nội dung và PR được hỗ trợ bởi SEO. Được khuếch đại ngay hôm nay.
• PlatoData.Network Vertical Generative Ai. Trao quyền cho chính mình. Truy cập Tại đây.
• PlatoAiStream. Thông minh Web3. Kiến thức khuếch đại. Truy cập Tại đây.
• Trung tâmESG. Than đá, công nghệ sạch, Năng lượng, Môi trường Hệ mặt trời, Quản lý chất thải. Truy cập Tại đây.
• PlatoSức khỏe. Tình báo thử nghiệm lâm sàng và công nghệ sinh học. Truy cập Tại đây.
• nguồn: https://www.nature.com/articles/s41565-024-01609-1