Nghiên cứu động vật

Tất cả chuột đều ở trên nền C57BL/6J được duy trì trong cơ sở động vật của Đại học Columbia ở 23 ± 1 °C và chu kỳ sáng và tối 12 giờ với quảng cáo tự do tiếp cận với thức ăn chow (PicoLab Rodent 5053) và nước. HFD chứa 60% chất béo được mua từ Chế độ ăn kiêng nghiên cứu (D12492i). Đối với các nghiên cứu ngăn ngừa béo phì, chuột đực hoặc chuột cái được cho ăn HFD và ip được tiêm P-G3 (10 mg/kg trọng lượng cơ thể) trong dung dịch muối đệm phốt phát (PBS) hai lần mỗi tuần trong thời gian chỉ định. Trong điều trị chuột gầy, chuột đực 3 tuần tuổi được cho ăn chế độ ăn chow và tiêm ip P-G10 hai lần mỗi tuần trong sáu tuần. Đối với nghiên cứu điều trị béo phì, những con chuột đực bị béo phì sau mười tuần cho ăn HFD và sau đó được tiêm NP (16 mg cho mỗi kg trọng lượng cơ thể) ba lần mỗi tuần trong sáu tuần nữa. Trọng lượng cơ thể được theo dõi hàng tuần và thành phần cơ thể được xác định bằng EchoMRI. Sau 4 giờ nhịn đói và XNUMX giờ cho ăn lại, những con chuột bị giết bởi CO₂ trợ tử để thu thập mô và huyết tương. Insulin huyết tương (Insulin ELISA, Mercodia), TGs (Thermo Science) và NEFA (Fujifilm Wako) đã được đo tương ứng. Để đo sự hấp thụ lipid, lipid được chiết xuất từ ​​​​các mẫu phân, như đã mô tả trước đây³⁸, và hàm lượng axit béo tự do (NEFA, Fujifilm Wako) đã được xác định. Ủy ban Chăm sóc và Sử dụng Động vật của Đại học Columbia đã phê duyệt tất cả các nghiên cứu trên động vật.

kiểu hình trao đổi chất

Đối với nghiên cứu đo nhiệt lượng gián tiếp, một nhóm chuột đực riêng biệt đã được áp dụng Hệ thống giám sát động vật trong phòng thí nghiệm toàn diện (Dụng cụ Columbus) sau ba lần tiêm P-G3 kể từ khi bắt đầu cho ăn HFD. Đối với thử nghiệm dung nạp glucose (GTT), chuột được nhịn ăn trong lồng sạch sẽ trong 16 giờ và sau đó được tiêm glucose (2 g mỗi kg trọng lượng cơ thể). Đường huyết được đo bằng máy đo đường huyết Breeze 2 (Bayer) tại các thời điểm được chỉ định. Đối với thử nghiệm dung nạp insulin (ITT), chuột được nhịn ăn trong 4 giờ và tiêm insulin (0.75 U trên mỗi kg trọng lượng cơ thể). Đối với thử nghiệm dung nạp lipid, chuột được nhịn ăn trong 4 giờ và sau đó được cho uống dầu ô liu (200 µl mỗi con chuột) bằng ống thông miệng. Các mẫu máu được lấy bằng chảy máu tĩnh mạch đuôi tại các thời điểm được chỉ định. Sau đó, hàm lượng lipid huyết thanh được đo phù hợp. Đối với quá trình phân giải mỡ, những con chuột được tiêm isoproterenol (10 mg mỗi kg trọng lượng cơ thể) và máu được thu thập thông qua chảy máu tĩnh mạch đuôi, đồng thời đo nồng độ NEFA (Fujifilm Wako) và glycerol (Sigma, F6428) trong huyết thanh.

Phân lập ECM mô mỡ

WAT đã được khử tế bào theo phương pháp được mô tả trước đó với các sửa đổi³⁹. Tóm lại, mô được đặt trong ống ly tâm 50 ml chứa dung dịch axit 0.02% trypsin–0.05% ethylenediaminetetraacetic với quỹ đạo lắc ở 37°C trong 30 phút, sau đó được ủ với dung dịch axit trypsin–ethylenediaminetetraacetic mới trong 30 phút tiêu hóa khác. Tiếp theo, mô được ủ tuần tự trong các dung dịch sau đây ở nhiệt độ phòng (RT) có lắc: Triton X-3 100% trong 1 giờ, dung dịch axit deoxycholic 4% trong 1 giờ, etanol 4% và axit peracetic 0.1% trong 2 giờ h. Mô được rửa sạch trong nước khử ion cất (ddH₂O) giữa các lần thay dung dịch. Sau đó, mô được rửa ở RT trong PBS (pH 7.4) trong 15 phút ba lần, sau đó trong ddH₂O trong 15 phút ba lần và 100% n-propanol trong 30 phút hai lần. Cuối cùng, mô được rửa bốn lần bằng ddH₂O trong 1 giờ trước khi sẵn sàng sử dụng.

Hình ảnh P-G5 được gắn nhãn Cy3

Hình ảnh phân bố mô ex vivo: những con chuột được cho ăn bằng HFD trong năm ngày để loại bỏ dấu vết nền có thể có từ chế độ ăn chow và sau đó các mô được thu thập. Các mô và ECM từ iWAT và eWAT được ủ trong PBS có hoặc không có P-G5 được đánh dấu Cy3 (100 μg trong 30 ml) trong 45 phút khi lắc ở 37°C. Sau đó, các mô được rửa bằng PBS bốn lần và sau đó được phân tích hình ảnh bằng hệ thống hình ảnh quang học PerkinElmer IVIS Spectrum (phần mềm Living Image 4.5.5).

Hình ảnh phân bố mô in vivo: chuột được cho ăn chow hoặc cho ăn HFD được tiêm polyme hoặc NP có nhãn Cy5 (200 μg mỗi con chuột) thông qua ip hoặc đường tiêm tĩnh mạch hoặc cục bộ vào iWAT. Tại các thời điểm nhất định, những con chuột được chụp ảnh in vivo bằng cách sử dụng hệ thống PerkinElmer IVIS (Phần mềm Living Image 4.5.5). Những con chuột sau đó bị giết và tín hiệu mô được đo bằng cách sử dụng cùng một hệ thống.

Nuôi cấy tế bào và biệt hóa tế bào mỡ

Các tế bào 3T3-L1 (ATCC CL-173) và C3H10T1/2 (CCL-226) được mua từ ATCC và được nuôi cấy trong môi trường Eagle cải biến có hàm lượng glucose cao của Dulbecco có bổ sung 10% huyết thanh bê (Gemini Bio-Products 100–506) hoặc bào thai huyết thanh bò (bất hoạt bằng nhiệt; Corning 35-011-CV) và 1× penicillin–streptomycin (Thermo Fisher). Các tế bào được biệt hóa trong cocktail adipogen tiêu chuẩn sau khi đạt đến hợp lưu trong hai ngày. Cocktail chứa môi trường Eagle đã được sửa đổi của Dulbecco, 10% huyết thanh bào thai bò, 1 μM dexamethasone, 10 μg ml^-1 insulin và 0.5 mM 3-isobutyl-1-metylxanthine. Hơn nữa, 5 μM rosiglitazone đã được sử dụng trong hai ngày đầu tiên để tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình biệt hóa tế bào C3H10T1/2. Sau khi gây cảm ứng trong hai ngày, các tế bào được duy trì trong môi trường hoàn chỉnh chứa 2.5 μg ml^-1 insulin cho đến khi biệt hóa hoàn toàn. Polyme P-G3 hoặc NP (10 μg ml^-1) đã được thêm vào vào những thời điểm được chỉ định và các tế bào đã được thu hoạch trong quá trình biệt hóa để phân tích. Các giọt lipid được hiển thị bằng cách sử dụng nhuộm Oil Red O hoặc nhuộm BODIPY. Các tế bào 3T3-L1 được xử lý bằng rapamycin (100 nM) từ ngày thứ 4 đến ngày thứ 6. Các tế bào C3H10T1/2 được xử lý bằng rapamycin (100 nM) từ ngày thứ 4 đến ngày thứ 9 để phân tích chức năng rapamycin trong thời gian dài. Các tế bào 3T3-L1 được xử lý bằng NMN (20 mM) trong quá trình biệt hóa từ ngày 0 đến ngày thứ 3 và được thu hoạch vào ngày thứ 4 để phân tích.

Preadipocytes của con người được nuôi cấy và biệt hóa theo một giao thức đã được công bố trước đó⁴⁰. Các tế bào được biệt hóa trong môi trường biệt hóa hoàn chỉnh có hoặc không có P-G3 (10 µg ml^-1) từ ngày 0 đến ngày thứ 7, sau đó chuyển sang môi trường duy trì có hoặc không có P-G3 từ ngày thứ 7. Các tế bào được thu hoạch vào ngày thứ 7 hoặc ngày thứ 9 của quá trình biệt hóa để phân tích thêm biểu hiện gen.

Điều trị cấy mỡ người

Giao thức thu thập sinh thiết mỡ người đã được xem xét và phê duyệt bởi Hội đồng Đánh giá Thể chế Y học Weill Cornell (19-05020126). Mô mỡ mạc nối tươi của con người được băm thành những miếng nhỏ (khoảng 10 mg), rửa bằng RT PBS và nuôi cấy trong Môi trường 199 bổ sung 50 µg ml^-1 gentamicin, insulin 7nM và dexamethasone 25nM⁴¹, đồng thời được xử lý có hoặc không có 10 µg ml^-1 P-G3. Môi trường được thay ba ngày một lần và các mô được thu hoạch vào ngày thứ 8 của quá trình điều trị để phân tích RNA.

Nhuộm dầu đỏ O

Các tế bào mỡ đã biệt hóa được rửa bằng PBS hai lần và sau đó được cố định trong dung dịch đệm chính thức 4% trong 30 phút. Tiếp theo, các tế bào cố định được rửa bằng nước hai lần, sau đó phủ isopropanol 60% trong 5 phút và sau đó nhuộm bằng dung dịch isopropanol O đỏ 60% mới được tạo và lọc trong 15 phút. Các tế bào sau đó được rửa bằng nước cất và chụp ảnh.

nhuộm endosome sớm

Các tế bào C3H10T1/2 được mạ trên một tấm kính che trong đĩa sáu giếng (Corning, 22 mm × 22 mm, Số 1) và được phân biệt bằng cách sử dụng giao thức được mô tả ở trên. Một chất đánh dấu endosome ban đầu (CellLight Early Endosomes-GFP, BacMam 2.0, Thermo Fisher Khoa học; 12 µl trong mỗi giếng) đã được thêm vào môi trường tế bào để nhuộm các endosome ban đầu qua đêm. Sau khi rửa bằng PBS, các NP được gắn nhãn Cy5 hoặc P-G3 hoặc Cy5 được thêm vào môi trường nuôi cấy với nồng độ cuối cùng là 100 µg ml^-1. Sau 15 phút hoặc 1 giờ ủ, các NP có nhãn P-G5 hoặc Cy3 được gắn nhãn Cy5 đã bị loại bỏ, sau đó các tế bào được rửa bằng PBS và được cố định trong 4% paraformaldehyde. Các hạt nhân được nhuộm bằng DAPI (4′, 6-diamidino-2-phenylindole). Các hình ảnh được chụp trên kính hiển vi đồng tiêu Nikon A1.

nhuộm bào quan tế bào

Các tế bào 3T3-L1 trưởng thành được mạ vào một tấm kính che có ngăn Lab-Tek II bốn giếng (Thermo Fisher Khoa học). P-G5 được dán nhãn Cy3 đã được thêm vào môi trường nuôi cấy với nồng độ cuối cùng là 10 μg ml^-1. Sau 24 giờ, các tế bào được thay đổi bằng môi trường mới chứa 50 nM LysoTracker Red DND-99 (Thermo Fisher Khoa học) hoặc 100 nM MitoTracker Red CMXRos (Công nghệ Tín hiệu Tế bào) để nhuộm lysosome hoặc ty thể, tương ứng trong 30 phút. Đối với nhuộm mạng lưới nội chất, các tế bào được rửa bằng dung dịch muối cân bằng của Hank với canxi và magiê, và thuốc nhuộm 1 μM ER-Tracker Red (Thermo Fisher Khoa học) đã được thêm vào cùng với Hoechst 33243 để nhuộm nhân trong tế bào sống. Để nhuộm các giọt lipid, các tế bào được cố định bằng 4% paraformaldehyd, được rửa bằng PBS và sau đó được ủ trong 1 μM BODIPY 493/503 (Thermo Fisher Khoa học) trong 5 phút sau đó rửa bằng PBS ba lần. Các hình ảnh được chụp trên thiết bị ZEISS Axio Observer 7.

Lớp phủ P-G3 trên vi hạt cacboxylat

Các polyme P-G3 dư thừa đã được thêm vào các vi hạt carboxylate (Polybead Carboxylate Microspheres 6.00 μm, Polyscatics) trong một ống máy ly tâm, được xoáy nhanh và ủ bằng cách lắc qua đêm ở 4°C. Các microbead được rửa bằng nước cấp nuôi cấy tế bào và sau đó quay xuống ở 4 °C ở 10,000 ×g trong 5 phút. Sau khi rửa ba lần, các hạt siêu nhỏ kết tủa được tái tạo huyền phù trong nước cấp nuôi cấy tế bào với thể tích ban đầu và điện thế bề mặt được đo bằng Malvern Zetasizer Nano ZS90. Để định lượng hàm lượng P-G3 trên các hạt siêu nhỏ, P-G5 được gắn nhãn Cy3 đã được sử dụng theo quy trình trên. Lượng P-G3 được xác định theo đường chuẩn. Các tế bào 3T3-L1 được biệt hóa trong tấm chuyển giếng 12 giếng (Corning). Sau đó, 10 μg ml^-1 P-G3 hoặc vi hạt chứa một lượng P-G3 tương đương được bổ sung trực tiếp vào môi trường. Trong nhóm transwell, các hạt vi nhựa được tách ra khỏi các tế bào bằng một miếng chèn có kích thước lỗ 0.4 μm.

tổng hợp và đặc tính hóa NP

Ở đây, 15 μmol P-G3 (Sigma-Aldrich) trong 5 ml metanol (Thermo Fisher Khoa học) được trộn với 75 μmol cholesterol chloroformate (Sigma-Aldrich) trong 5 ml dichloromethane (Thermo Fisher Khoa học), sau đó thêm 300 μmol N,N-diisopropylethylamine (Sigma-Aldrich). Hỗn hợp này sau đó được khuấy ở 50°C trong 3 giờ, và thẩm tách trong nước siêu tinh khiết trong 72 giờ để tạo ra P-G3-Chol(5). Để chế tạo các NP P-G3-Chol(5), 1 mg P-G3-Chol(5) đã được hòa tan trong 200 μl chloroform (Thermo Fisher Khoa học), sau đó thêm 1 ml H₂O và siêu âm trong 2 phút. Cuối cùng, 5 ml H₂O được thêm vào hỗn hợp và dung môi dư thừa được loại bỏ bằng cách sử dụng thiết bị bay hơi quay để tạo NP P-G3-Chol(5). Cấu trúc của các NP thu được được đặc trưng bởi thiết bị Bruker Avance III 400 NMR. Hình thái được chụp bằng kính hiển vi điện tử truyền qua Titan Themis 200. Đường kính thủy động lực học và tiềm năng zeta của các NP được đo bằng Malvern Nano ZS90 Zetasizer. Độ hấp thụ được đo bằng máy quang phổ Denovix DS-11+.

NAD⁺ nồng độ tế bào

Preadipocytes hoặc adipocytes được điều trị bằng P-G3 (10 μg ml^-1) hoặc PBS trong 14 giờ và NAD di động⁺/Mức NADH được xác định bởi NAD⁺/Bộ đo màu định lượng NADH (BioVision K337) theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Phân tích biểu hiện gen

Tổng số RNA từ các mô hoặc tế bào được chiết xuất bằng thuốc thử TRIzol (Thermo Fisher) kết hợp với bộ phân lập RNA từ MACHEREY-NAGEL. Ở đây, 1 μg RNA đã được sử dụng để sao chép ngược để tổng hợp cDNA bằng cách sử dụng bộ phiên mã ngược cDNA dung lượng cao (Hệ thống sinh học ứng dụng). Hệ thống phản ứng chuỗi polymerase (PCR) thời gian thực Bio-Rad CFX96 được sử dụng để thực hiện phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực định lượng (qPCR) với GoTaq qPCR Master Mix (Promega). Biểu hiện gen tương đối được tính toán bằng cách sử dụng phương pháp ΔΔCt với Cyclophilin A or Rpl23 làm gen tham chiếu. Trình tự mồi có sẵn trong Bảng bổ trợ 4 và 5.

scRNA-seq

Các tế bào 3T3-L1 được nuôi cấy và biệt hóa như mô tả ở trên. P-G3 (10 μg ml^-1) hoặc PBS đã được thêm vào các ô kể từ ngày 0 của quá trình biệt hóa. Các tế bào được thu thập vào ngày biệt hóa 0, 3 và 6 lần lượt là preadipocytes, adipogenesis sớm và tế bào mỡ trưởng thành (Bảng bổ trợ 1). Khi thu thập, các tế bào được phân tách nhẹ nhàng thành các tế bào đơn lẻ nhờ quá trình tiêu hóa enzyme trypsin. Khả năng tồn tại của tế bào đã được xác nhận trên 85% bằng cách loại trừ trypan blue trước khi sử dụng scRNA-seq bằng công nghệ 10x Genomics Chromium. Các thư viện cDNA đầu 3 ô đơn thu được đã được giải trình tự trên hệ thống giải trình tự Illumina NovaSeq 6000 (đầu cặp 2 × 100 bp) tại Lõi phân tích tế bào đơn của Trung tâm bộ gen Columbia. Tại đây, đường dẫn Cell Ranger của 10x Genomics (v. 3.1.0) với bản sao tham chiếu chuột GRCm38 đã được sử dụng để xử lý dữ liệu. Chi tiết về thông tin mẫu cho scRNA-seq được liệt kê trong Bảng bổ sung 2. Trong các mẫu chứa tế bào mỡ trưởng thành (LQ004 và LQ005), môi trường huyền phù tế bào cũng chứa các giọt lipid. Các giọt lipid cũng được mã hóa một cách tình cờ. Đây là lý do khiến số lượng được mong đợi cao từ trình sắp xếp thứ tự với số lần đọc trung bình thấp trong LQ004 và LQ005. Chúng tôi đã loại trừ tiếng ồn của giọt lipid trong dữ liệu giải trình tự bằng cách chỉ giữ lại các tế bào có số lượng gen (2,500 đến 9,000 gen) và tỷ lệ gen ty thể dưới 20% để phân tích xuôi dòng. Chi tiết về phần mềm và thuật toán xem trong Bảng bổ trợ 3.

Tốc độ RNA và phân tích mạng lưới quy định

Quá trình tiền xử lý phân tích đơn ô để chuẩn hóa và phân cụm không giám sát đã được thực hiện với Scanpy (v. 1.7.1) trong Python (v. 3.6). Chúng tôi đã chú thích các loại tế bào dựa trên các dấu hiệu tạo mỡ và tạo mỡ đã biết. Chúng tôi đã phân loại nhóm con của các tế bào mỡ trưởng thành là các tế bào mỡ sinh mỡ khi quan sát thấy biểu hiện cao của các gen tích lũy lipid. Nhìn chung, bốn loại tế bào đã được quan sát thấy trong bộ dữ liệu của chúng tôi: preadipocytes, adipocytes chưa trưởng thành, adipocytes và lipogen adipocytes (Hình XNUMX). 4b, Dữ liệu mở rộng Hình. 5a và bảng bổ trợ 1). Tiếp theo, chúng tôi đã tính toán vận tốc RNA (tốc độ ghép nối và phân hủy) dựa trên động lực học mRNA đã ghép nối và không ghép nối của từng tế bào bằng cách sử dụng scVelo (v. 0.2.1) và velocyto (v. 0.17.16) (Hình. 4e–h và dữ liệu mở rộng Hình. 5d, e). Các mạng điều tiết đã được SCENIC (v. 1.2.2) (v. XNUMX) xác định bằng mô hình cùng tồn tại của yếu tố phiên mã và các gen tác động xuôi dòng của nó (Hình dữ liệu mở rộng. 5c). Các phương pháp phục hồi vận tốc và bộ điều chỉnh RNA không nhạy cảm với việc chuẩn hóa dữ liệu. Chúng tôi đã sử dụng dữ liệu trình tự thô và chú thích loại ô làm đầu vào để thực hiện phân tích trên.

Phân tích con đường gen bị thay đổi

Chúng tôi đã sử dụng phần mềm QIAGEN IPA để tính toán ý nghĩa thống kê (Hình. 4i). Tóm lại, phần mềm IPA đã sử dụng thử nghiệm chính xác của Fisher để tính toán sự trùng lặp của tập dữ liệu của chúng tôi với cơ sở dữ liệu tham chiếu (nghĩa là tập hợp các phân tử trong các lộ trình chính tắc). Các p giá trị đo lường khả năng liên kết được quan sát giữa tập dữ liệu thử nghiệm của chúng tôi và một lộ trình chính tắc cụ thể do cơ hội ngẫu nhiên. Con đường tương ứng được liên kết đáng kể với tập dữ liệu thử nghiệm khi p giá trị nhỏ (nghĩa là p <0.05).

Phân tích hoạt động nội bào lysosomal

Hoạt tính lysosomal được xác định bằng cách sử dụng bộ xét nghiệm hoạt động nội bào lysosomal BioVision (k448-50). Tóm lại, các tế bào C3H10T1/2 đã được xử lý trước có hoặc không có P-G3 từ ngày biệt hóa thứ 5 đến ngày thứ 7. Bafilomycin A1 được sử dụng như một chất kiểm soát chất ức chế lysosome. Sau đó, các tế bào này được ủ trong môi trường tế bào có bổ sung 0.5% huyết thanh bào thai bò và chất nền tự dập tắt trong 2 giờ, sau đó bổ sung dung dịch đệm xét nghiệm để kết thúc thí nghiệm. Các tế bào sau đó được phân tách và được phân tích tế bào học dòng chảy (laser kích thích 488nm). Chiến lược gating được thể hiện trong Dữ liệu mở rộng Hình. 6e. Dữ liệu tế bào học dòng chảy được phân tích bằng phần mềm FCS Express (v. 7.14.0020).

Tây phương

Các tế bào hoặc mô được ly giải bằng dung dịch đệm ly giải protein tổng số được bổ sung cocktail ức chế protease và phosphatase. Các chất nổi trên bề mặt protein đã được định lượng protein bằng cách sử dụng bộ Pierce BCA và 10% gel natri dodecyl sulfate–phân tách điện di trên gel polyacrylamide. Các kháng thể được sử dụng trong nghiên cứu này như sau: p-mTOR (CST #2971), p-S6K (CST #9205), p-4E-BP1 (CST #2855), p-AKT (Ser 473, CST #9271), p-AKT (T308, CST #13038), p-GSK3b (Ser 9, CST #9322), FASN (CST #3180), ADIPSIN (Hệ thống R&D, #AF5430), Adiponectin (Thermo Fisher, #PA1-054), CEBPA (Santa Cruz, sc-61), HSP90 (Proteintech, #13171-1-AP) và GAPDH (Proteintech #HRP-60004). Việc pha loãng kháng thể dựa trên khuyến nghị trên trang web của nhà sản xuất.

đánh giá mô học

Sau khi mổ xẻ, eWAT, iWAT và gan ngay lập tức được cố định trong dung dịch đệm formalin 10%. Sau khi cố định và khử nước, các mô được nhúng vào parafin, nhuộm bằng kháng thể chống F4/80 (CST, #70076), haematoxylin và eosin (H&E) hoặc axit định kỳ–Schiff, và chụp ảnh dưới kính hiển vi (Olympus IX71). Đối với hóa mô miễn dịch, eWAT, iWAT và gan ngay lập tức được cố định trong 4% paraformaldehyd ở 4 ° C qua đêm, sau đó được khử nước trong 30% sucrose ở RT qua đêm, sau đó nhúng vào môi trường nhiệt độ cắt tối ưu (hợp chất Sakura Tissue-Tek OCT 4583). Sau khi gắn vào các phiến kính 5 μm, các phần đông lạnh được ủ với kháng thể caveolin-1 (D46G3) (CST, #3267; độ pha loãng 1:250) và sau đó là kháng thể Alexa 488 chống thỏ (Thermo Fisher Khoa học, #A27034; 1:1,000 pha loãng), và được chụp ảnh thêm bằng kính hiển vi đồng tiêu. Các hình ảnh được xử lý bằng phần mềm ImageJ (v. 2.1.0; Viện Y tế Quốc gia).

Phân tích thống kê

Tầm quan trọng giữa các nhóm được đánh giá bằng cách sử dụng Học sinh hai đuôi t-kiểm tra. Sự khác biệt giữa các nhóm có ý nghĩa thống kê nếu p giá trị nhỏ hơn 0.05. Trong nghiên cứu này, tất cả dữ liệu được biểu diễn dưới dạng trung bình ± sai số chuẩn của giá trị trung bình (sem). Prism 9.3.1 (GraphPad) đã được sử dụng để phân tích.

Tóm tắt báo cáo

Thông tin thêm về thiết kế nghiên cứu có sẵn trong Tóm tắt báo cáo danh mục đầu tư tự nhiên liên kết đến bài viết này.

• Phân phối nội dung và PR được hỗ trợ bởi SEO. Được khuếch đại ngay hôm nay.
• Platoblockchain. Web3 Metaverse Intelligence. Khuếch đại kiến ​​thức. Truy cập Tại đây.
• nguồn: https://www.nature.com/articles/s41565-022-01249-3