ナノボット合成

ナノボットは前述のように準備されました³³。簡単に言うと、MSNP は修正された Stöber 法を使用して合成されました。⁴¹、トリエタノールアミン（35 g）、超純水（20 ml）、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（CTAB; 570 mg）を95 ℃で30 分間撹拌しながら反応させます。続いてオルトケイ酸テトラエチル(1.5 ml)を滴下した。混合物を2 °Cで95時間反応させ、得られたMSNPを遠心分離によって収集し、エタノールで洗浄しました(2,500回、XNUMXg、 5分）。 CTAB テンプレートを除去するために、MSNP を酸性メタノール (1.8 ml HCl、30 ml メタノール) 中で 24 時間還流下に置きました。次に、MSNP を遠心分離によって収集し、エタノール (2,500 ml) で XNUMX 回洗浄しました。g、5 分）MSNP（6 mg ml）にAPTES（MSNP 1mgあたりXNUMX μl）を加えてアミン修飾を組み込む前^-1) 70% エタノール溶液中で 70 °C で 1 時間激しく撹拌します。 MSNP-NH₂ 収集し、遠心分離によりエタノールで 1,150 回、水で XNUMX 回洗浄しました (XNUMX 回、XNUMXg、 5分）。 MSNP-NH₂ 1 mg mlの濃度でPBSに再懸濁しました^-1 総量900 μl、グルタルアルデヒド(100 μl)で室温で2.5時間活性化。活性化された MSNP-NH₂ 回収し、遠心分離（1,150g、5 分）、ウレアーゼ溶液（3 mg ml）に再懸濁^-1) およびヘテロ二官能性 PEG (1 kDa HS-MSNPs-NH 5 mg あたり XNUMX μg PEG)₂)をPBSに溶解し、室温で24 時間反応させました。次に、得られたナノボットを収集し、遠心分離 (1,150g、5 分）前に説明したように調製したAuNPの分散液にそれらを再懸濁する前に⁵¹10 分間反応させた後、遠心分離（1,150×XNUMX回）により十分に洗浄します。g、 5分）。

MSNP、MSNP-NH の流体力学的サイズ分布と表面電荷₂、ナノボットおよび AuNP 装飾ナノボットは、それぞれ Wyatt Mobius 動的光散乱システムと Malvern Zetasizer を使用して測定されました。すべての場合において、濃度は20 μg mlでした^-1 取得時間は 5 s、実験ごとに XNUMX 回の実行を使用します。粒子タイプごとに XNUMX 回の測定を実行しました。

FITC MSNP の合成

FITC（2 mg）、エタノール（5 ml）、APTES（400 μl）の混合物を調製し、30 分間撹拌しました。次に、オルトケイ酸テトラエチル (1.25 ml) を FITC-APTES 混合物 (250 μl) と組み合わせて滴下したことを除いて、前述の MSNP 合成プロトコールに従いました。 FITC標識ナノボットを得る機能化ステップは前述の通りである。

AuNPの合成

AuNPは報告されている方法を使用して合成されました³³。簡単に言うと、すべての材料を新しく調製した王水を使用して洗浄し、水で徹底的にすすぎ、風乾しました。続いて、1 mM AuCl₄ 還流システムに組み込まれた丸底フラスコ内で撹拌しながら、溶液を沸点まで加熱した。この後、10 mlのクエン酸ナトリウム溶液(30.8 mM)を加え、溶液を20 分間煮沸すると赤色になりました。次に溶液を1 時間撹拌しながら室温まで冷却しました。得られた AuNP は暗所で保管され、透過型電子顕微鏡を使用して特性評価が行われました。

酵素活性

ナノボットの酵素活性、 ¹⁸F-ナノボットと ¹³¹i-nanobots はフェノールレッドを使用して測定されました。これを行うには、2 µl のナノボット (1 mg ml)^-1）を96ウェルプレートに加え、200 mMフェノールレッド中の異なる尿素溶液（0、50、100、200 mM）1.1 μlと混合しました。 560 nmでの吸光度を37 ℃で経時的に測定しました。

光学顕微鏡によるナノボットの運動ダイナミクス

ナノボットの光学ビデオは、浜松ホトニクス製高速 CCD カメラと 1.25 倍の対物レンズを組み合わせた Leica Thunder 顕微鏡を使用して取得されました。このために、ナノボットを遠心分離し、50 μlのPBSに再懸濁しました（最終濃度は20 mg ml）^-1）。次に、ペトリ皿に 3 ml の PBS または 300 mM 尿素溶液 (PBS 溶液) を入れ、顕微鏡で観察しました。ナノボットを含む 5 μl ドロップ (20 mg ml)^-1) を液体で満たしたペトリ皿に加え、ビデオを 25 フレーム/秒で記録しました。 ROI 内のビデオピクセル強度分布は、ImageJ ソフトウェアを使用して 15 秒間隔で分析されました。

[ によるナノボットの放射性標識¹⁸F]F-PyTFP

[の合成¹⁸F]F-PyTFP

[¹⁸F]F-PyTFP は、以前に報告された方法に従って、Neptis xSeed モジュール (最適化された放射化学アプリケーション) で合成されました。³³.

の合成 ¹⁸F標識ナノボット

ナノボットには [¹⁸F]F-PyTFP、以前に確立された手順に基づいて若干の変更を加えたもの³³。簡単に言うと、200 µl のナノボット溶液 (1 mg ml)^-1）を遠心分離（10 分、13,853g)、10 μlのPBS (1 mM、pH 8)に再懸濁し、4 μlの[¹⁸F]F-PyTFPのアセトニトリル溶液(約37 MBq)、室温で35分間。インキュベーション後、反応混合物を水 (200 µl) で希釈し、遠心分離 (5 min、13,853g）。次いで、得られたペレットを水で３回洗浄した後、用量キャリブレーター（ＣＰＣＲＣ－２５Ｒ、Ｃａｐｉｎｔｅｃ）で測定した。放射化学収率は、洗浄後のナノボット内に存在する放射能の量と初期の放射能の量との間の比として計算された。精製後の放射化学純度は、iTLC-SG クロマトグラフィー紙 (Agilent Technologies)、固定相と移動相としてそれぞれジクロロメタンとメタノール (25:99) を使用したラジオ薄層クロマトグラフィー (ラジオ TLC) で測定したところ、2% 以上でした。 ＴＬＣプレートを、ＴＬＣリーダー（ＭｉｎｉＧＩＴＡ、Ｒａｙｔｅｓｔ）を使用して分析した。

の安定性 ¹⁸F-ナノボット

の安定性 ¹⁸F 標識ナノボットは、次の媒体を使用して測定されました: (1) 300 mM 尿素、(2) 水、および (3) 腫瘍を有する動物からの尿。 ¹⁸F標識ナノボット（10 μl）を対応する溶液（100 μl）と室温で1 時間インキュベートしました。その後、遠心分離によりナノボットと上清を分離して回収し、用量校正器（CPCRC-25R）で放射能を測定した。

ナノボットの放射性標識 ¹³¹I

ウレアーゼ ナノボットの放射性ヨウ素化は、ナノボットを注射剤 [¹³¹[I]NaI 溶液 (925 MBq ml)^-1; GEヘルスケア）。簡単に言うと、400 μlのウレアーゼナノボット溶液（1 mg ml）^-1) を遠心分離しました (13,853g、5 分)、100 μlのPBS (10 mM、pH 7.4)に再懸濁し、25 μlまたは185 μlの注射剤[¹³¹所望の最終活性に応じて、I]NaI (それぞれ約 42.55 または 277.5 MBq) を 30 分間投与します。インキュベーション後、反応混合物を遠心分離 (13,853g、 5分）。得られた沈殿を水(100 μl)で25回洗浄した。上清と沈殿中の放射能は用量キャリブレーター (CPCRC-XNUMXR) を使用して測定し、両方の画分をラジオ TLC で分析しました。 ¹⁸F-ナノボット。

動物モデルの開発

マウスは、欧州理事会指令 2010/63/UE および内部ガイドラインに従って維持および処理されました。すべての実験手順は、CIC biomaGUNE 倫理委員会および地方自治体 (Diputación Foral de Guipuzcoa、PRO-AE-SS-276) によって承認されました。画像解析 (PET と MRI の両方) は、動物のグループ分布に関しては盲検化されました。

膀胱癌の同所性マウスモデルは、MB49細胞（マウス膀胱癌細胞株）をC57BL/6JRj雌マウス（8週齢、Janvier）に膀胱内投与することによって作製した。腫瘍の蓄積を決定することを目的とした実験 (20 つのグループ、詳細は下記) では、次の仮定の下、精度分析を使用して決定したとおり、グループあたり 20 匹の動物に接種しました。必要な精度は 95%。予想標準偏差、±20%。信頼性、XNUMX%。動物の損失、XNUMX%。治療効果実験 (XNUMX つのグループ、詳細は下記) では、片側スチューデント法を使用して計算したように、XNUMX グループあたり XNUMX 匹の動物が含まれました。 t- 検定、以下の仮定による 2 つの独立した平均間の差: 帰無仮説、治療は腫瘍の増殖に影響を与えない。 α、0.05; 1 − β、0.95;標準偏差、±50%;グループ間の期待差、50%。動物の損失、20%。実験は操作上の理由から XNUMX つのバッチで実施されたため、XNUMX つの対照グループが両方のバッチに含まれていました (表 2)、すべての動物がプールされました。腫瘍の確立のために、純粋なO3中のXNUMX%イソフルランの吸入によってマウスを麻酔した。₂ 1.0% O 中の 1.5 ～ 100% イソフルランによって維持されます。₂。次に、膀胱を空にし、50 μlのポリ尿素を膀胱内に点滴注入することにより、尿路上皮に化学的損傷を誘発した。l-リジン (Sigma-Aldrich) を 24 ゲージのカテーテルを通して 15 分間注入します。その後、膀胱を再び空にし、MB49 細胞 (10⁵ 高グルコースDMEM（100 μl）中の細胞）を1 時間点滴した後、カテーテルを取り外し、腹部マッサージによって膀胱を空にしました。実験全体を通じて、健康と福祉のモニタリングのためにマウスの監視と体重測定が行われました。体重減少が 20% を超えた場合、または臨床症状に基づいて、担当獣医師の基準に基づいてヒトのエンドポイントが適用されました。

腫瘍サイズの追跡

MRI検査は、7 mT mのBGA-14S勾配インサートを備えた7 T Bruker BioSpec USR 70/30スキャナー（Bruker BioSpin）を使用して、腫瘍誘発の12日および440 日後に実施されました。^-1 および無線周波数用の 112/086 QSN 共振器 (T12053V3)¹⁴ 送信用、および RF 受信用のラット脳表面コイル (T11205V3) (どちらも 300 MHz で動作)。動物はイソフルラン（4％O1.5中で導入用に50％、維持用にXNUMX％）で麻酔をかけました。₂/50%N₂ 混合物）をMR互換クレードルに置きます。体温と呼吸数は、体温を維持するために小型齧歯類のエアヒーター システムに接続された MR 互換モニタリング装置 (モデル 1030 SA、Small Animal Instruments) を使用して継続的にモニタリングされました。参照画像を取得した後、以下のパラメーターを使用して、スピンエコーベースの拡散強調イメージング シーケンスを使用して腫瘍をイメージングしました。T_E) = 22.3 ms、繰り返し時間 (T_R) = 2,500 ミリ秒、 n = 2 つの平均、0 つの AXNUMX 画像 (基本画像と b = 0 秒 mm^-2) と、勾配持続時間の (1, 0, 0) 方向の拡散勾配を使用して取得された XNUMX つの DW 画像 δ = 4.5 ms および勾配分離 Δ = 10.6 ms、与える b = 650 秒 mm^-2、16 × 16 mm² 視野、160 × 160 ポイントの画像マトリクス サイズ、厚さ 20 mm の 0.5 枚の連続スライス (ギャップなし、インターリーブ モードで取得)、ピクセルあたり 192.9 Hz の帯域幅。腫瘍を視覚化するために、画像は ImageJ ソフトウェアで後処理され、拡散勾配で取得された画像を分割しました (b = 650 秒 mm^-2) (なしで取得したものによる)b = 0 秒 mm^-2)、3D ガウス フィルターを適用します (σ_x = σ_y = σ_z = 0.7) を結果に加えます。腫瘍の容積を決定するために手動で腫瘍の輪郭を描いた。

生体内での生体内分布

腫瘍誘導後 15 日目に、マウスをランダムに 3 つのグループに分けて、グループ間の均一な平均​​腫瘍体積分布を取得しました。 PET-CTスキャン（MOLECUBES βおよびX-CUBEスキャナー）は、100 μlの膀胱内投与のXNUMX 時間後に取得されました。 ¹⁸F-BSA (グループ 1 および 2) または ¹⁸濃度 3 µg ml の F-ウレアーゼ (グループ 4 および 200) ナノボット^-1、水 (グループ 1 および 3) または水中の 300 mM 尿素 (グループ 2 および 4) をビヒクルとして使用します (表 1）。画像取得のために、動物に麻酔（純酸素中５％イソフルラン）を導入し、仰臥位に置き、その後、膀胱排出のために腹部をマッサージした。その直後、対応する ¹⁸F標識ナノボット（¹⁸F-BSA/¹⁸F-ウレアーゼの水/尿素溶液）を24ゲージのカテーテルを通して膀胱に注入し、1 時間インキュベートした後、カテーテルを取り外し、膀胱を空にし、マウスを麻酔から回復させました。で t 投与後 = 3 時間後に、動物に再度麻酔をかけ、10 分間静的な全身 PET 画像を取得し、続いて CT スキャンを行いました。 PET 画像は、ランダム、散乱、減衰補正を備えた 3D 順序付きサブセット期待値最大化再構成アルゴリズムを使用して再構成されました。同じマウスの PET-CT 画像を同時登録し、PMOD 画像処理ツールを使用して分析しました。放射能濃度対時間のプロットは、3D 等高線ツールを使用して膀胱上部領域に対象ボリュームを作成し、臓器あたりの放射能 (減衰補正) をキロベクレルで測定することによって得られました。結果は、校正係数を適用することによって補正され、その後、MRI 由来の腫瘍体積によって正規化されました。

生体外研究

病理組織学的分析

すべてのイメージングが完了した後、選択された膀胱 (n = 3/グループ) 腫瘍を有する健康な動物から無菌条件で取り出し、直ちに 4% ホルムアルデヒドで固定しました。次に、ヘマトキシリン・エオシン染色のために 2 ～ 3 µm の切片を採取する前に、膀胱をパラフィンに包埋しました。代表的な画像は、組織病理学的検査のすべての条件から得られました。

ICP-MS分析

測定は、ASX-560 オートサンプラー (CETAC Tech) と組み合わせた Thermo iCAP Q ICP-MS (Thermo Fisher Scientific) で実行されました。すべてのイメージングが完了した後、動物を屠殺し、膀胱を選択しました (n = 2 グループあたり 1 個。 XNUMX つのグループ）を収集し、XNUMX ml の HNO で消化₃:HCl (4:1 混合物)。分散液を器官が完全に溶解するまで煮沸した。次に、溶液を室温まで冷却し、ICP-MS を使用して分析して各サンプルの Au 濃度を決定し、結果を組織 XNUMX グラムあたりの注入量のパーセンテージ (%ID g) に変換しました。^-1).

免疫組織化学および共焦点顕微鏡イメージング

免疫組織化学分析では、腫瘍を有する動物に水または 300 mM 尿素に溶かした FITC 標識ナノボットを投与しました (n = 4 グループあたり XNUMX)、PET-CT 研究の場合は上記のように。さらに、ナノボットを持たない腫瘍を有する動物を対照群として使用しました（n = 2)。すべての場合において、膀胱を収集し、凍結し、10 µm の切片に切断し、直ちに 10% ホルムアルデヒドで 15 分間固定し、10 mM PBS で洗浄した後、50 mM NH でインキュベートしました。₄ClをPBS中で5 分間洗浄した後、PBSで再度洗浄します。透過化処理は、メタノール:アセトン (1:1) を用いて室温で 5 分間、0.1% Triton を含む PBS で 5 分間実行されました。 PBSで洗浄した後、サンプルを5% BSA-0.5% TweenのPBS溶液で室温で15分間飽和させ、1% BSA中のマウス抗FITC（1:100、Abcam）とともに室温で5時間インキュベートしました。 –0.5% トゥイーン。切片を10 mM PBSで5 分間30回洗浄し、647％BSA-1％Tween中の二次抗体Alex Fluor 1,000ロバ抗マウスIgG（Molecular Probes、Life Technologies、5:0.5）とともに室温で3 分間インキュベートしました。 ＰＢＳ中で再度洗浄し（３ × ５ 分）、４，６−ジアミジノ−２−フェニルインドールを含むＰｒｏＬｏｎｇ抗退色キット（ＤＡＰＩ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてマウントした。画像は、Leica STELLARIS 5 共焦点顕微鏡 (UPV/EHU Scientific Park) を使用して、すべてのセクションで同一の設定、つまりタイル イメージングとスティッチングを使用した倍率×4,6 (通常 2 × 5 の視野) で取得しました。レーザーラインと検出ウィンドウは、DAPIの場合は10 nmと4～5 nm、FITC白色レーザーの場合は405 nmと440～503 nm、Alexa489白色レーザーの場合は494 nmと602～653 nmでした。

光学的クリアリング

4% パラホルムアルデヒドと PBS で灌流した後、膀胱サンプルを取り出し、4% パラホルムアルデヒドで 4 °C で一晩固定し、5% 低融点アガロースを含む 0.8 ml シリンジに埋め込んで円筒状のブロックを形成し、石英キュベットに取り付けます。ブロック全体をメタノール:H を使用して徐々に脱水しました。₂O、4 °C (30%:70% 1 h、50%:50% 1 h、70%:30% 1 h、100%:0% 1 h、その後 100% メタノールで一晩、再度 4 h 1 h)、最後にイメージング用の屈折率整合溶液としてベンジルアルコール - 安息香酸ベンジル (BABB) に浸漬します。緑色の FITC ナノボットと市販の赤色粒子の in vitro 比較では、BABB 除去に耐性のある直径 XNUMX µm の DiagNano (Creative Diagnostics) 赤色蛍光シリカ ナノ粒子を使用しました。

自家蛍光および偏光sLSイメージング

ライトシートイメージングは​​、IRB Barcelona で開発された鮮明な全臓器イメージング用のカスタム システムである MacroSPIM で実行されました。^44,45。簡単に言うと、サンプルはアガロースブロックに埋め込まれ、サンプルと一緒に透明になり、石英キュベット内で画像化されます。自家蛍光イメージングでは、488、561、または 638 nm のレーザーを使用し、50 mm の色消しダブレット円柱レンズ (ACY254-050-A、Thorlabs) を通して照明を提供しました。ストライプアーチファクトを軽減するために、ライトシートは、G10 4 mm 色消しダブレットレンズ (QI Optic Photonics) を備えた 322288322f 望遠鏡に沿って共振スキャナー SC-100 (EOPC) で旋回されます。組織の自己蛍光は、バンドパスまたはロングパス蛍光フィルターを通して収集され、ORCA Flash v2 カメラ (浜松ホトニクス) で記録されます。撮影は×9.6 ズーム、×8 レンズ、×2 チューブレンズを使用し、×0.6 で実行されました。ライトシートは視野全体で平坦化され、5 ～ 6 µm の軸方向解像度が得られました。 3D イメージングは​​ 2.5 µm ステップで実行されました。膀胱全体のイメージングを2 × 3または3 × 4で実施 XY タイルは臓器のサイズに応じて異なります。

sLS イメージングは​​、蛍光フィルターを取り除くか、レーザーを透過するフィルターを使用することによって実現されました。ライトシートの回転によりレーザースペックルノイズが減少し、前に示したようにレーザーコヒーレンスの時間的平均化が実現しました。⁵²。照明における直線ライトシート偏光の方向は、ピボットスキャナの前で半波長板 (AHWP05M-600、Thorlabs) を回転させることによって制御されました。検出された信号は、検出時にフィルターホイールの前に回転直線偏光子 (LPVISC100、Thorlabs) を使用して偏光で選択され、蛍光検出で >50% の強度損失が発生しました。一般に、sLS 信号分布は偏光子の向きによって変化しますが、組織の自家蛍光信号は偏光子の回転による影響を受けません。 sLS は、BABB で 2.4 ± 0.3 µm の空間分解能を実現します。これは、蛍光ライトシートイメージングの分解能に匹敵します (ガウス関数を XY 単一粒子の画像応答、補足図。 8l–m）、空気中での理論分解能（最大マクロズーム×1.53 で開口数 (NA) = 0.2 で 8 µm) に近くなります。

画像処理と3D解析

ライトシート データセットの画像処理、セグメンテーション、分析は ImageJ/Fiji を使用して行われました。 3 & 4 Imaris Viewer 9.9 で生成されました (https://imaris.oxinst.com/imaris-viewer) および補足ビデオ 3 Imaris 9 で生成されました (https://imaris.oxinst.com/）（ビッ​​トプレーン、オックスフォード・インスツルメンツ）。タイル化されたライトシート データセットは MosaicExplorerJ でステッチされました⁵³。膀胱組織の 3D セグメンテーションは、仮想モードで大容量の半自動 3D アノテーションを行うためのカスタム ImageJ/Fiji マクロを使用して実行されました。簡単に説明すると、最初のスクリプト「Macro1」は 3D 画像スタックをロードし、複数の平面で ROI にユーザーが注釈を付けられるようにし、ROI を自動的に補間して 3D マスクを生成およびエクスポートします。注釈を最小限に抑えながら良好なセグメンテーションの連続性を促進するために、ROI は 15 面ごと (37.5 µm ごと) に描画されました。 2 番目のスクリプト「Macro3」は、スタック全体をメモリにロードせずに、3D マスク間または XNUMXD マスクと元のデータの間で数学演算またはブール演算をプレーンごとに実行し、結果を新しいスタックとして保存します。すべてのマスクは、自己蛍光画像に注釈を付けることによって生成されました。

腫瘍と健康な組織の両方の表層（図） 3）は、フィジーの杖と投げ縄ツールを使用してマスク内の膀胱腔に輪郭を描きました。この最初の反復を BC1 と呼び、その後の Macro1 の実行では、この 3D 輪郭が定義されたピクセル量だけ自動的に拡張され、拡張を増加させながら新しいマスク反復 BC2、BC3 などが生成されます。腫瘍組織と健康な組織の両方を含む最初のレイヤーであるマスク L1 は、BC1 からマスク BC2 を減算することによって取得され、以下同様に同心円状のレイヤーとして L2 と L3 が得られます。空洞に最も近い腫瘍体積は、ワンドとなげなわツールを使用して腫瘍に注釈を付けてマスク T1 を作成することによって取得され、一方、健康な尿路上皮 3D 層はマスク U1 内で個別に検出されました。 L1 から U1 を減算すると、腫瘍の表層などが得られます。L2 − U1、L3 − U1 となります。逆に、尿路上皮の最初の層は、L1 から T1 を減算することによって得られます。図のすべてのレイヤー。 3 厚さは 33 µm と定義されています。

同じ一連のマクロと手順 (ImageJ ワンド ツール、500 µm のデジタル侵食など) を使用して、膀胱組織の内部の輪郭を描いてセグメント化し、膀胱の内部組織体積を推定しました (図 XNUMX)。 4、詳細については上記を参照してください）。散乱信号強度のヒストグラムは、散乱信号とマスクを組み合わせてフィジーで作成されました。

RNT を使用して ¹³¹アイナノボット

腫瘍移植後 8 日目から 15 日目までに、動物を 1 つのグループ (グループ 6 ～ XNUMX) に分け、各グループ間で同様の平均腫瘍体積を達成することを試みました (表) 2）。実験のために、動物に麻酔（純粋なO5中のXNUMX％イソフルラン）を導入しました。₂）腹部をマッサージして膀胱を空にする前に、仰向けに位置させます。その直後、100 μg mlの濃度の適切な治療薬400 μlを投与^-1 （表 2）を、24ゲージのカテーテルを使用して膀胱に注入した。治療薬とビヒクル（水または尿素）は、カテーテルを除去する前に 1 時間膀胱内に残りました。腹部マッサージによって膀胱を再び空にし、マウスはケージ内で麻酔から回復し、放射性汚染を除去するための治療の24 時間後に動物ケージのおがくずを交換しました。

MRIで治療効果を判定

各マウスに対して 1 つの MRI 研究を実施しました。(7) 腫瘍接種後 14 日目から 2 日目の間で動物をグループ間でランダム化し、初期 (治療前) 腫瘍体積を測定しました。 (16) 治療効果を評価するための腫瘍接種後 (治療後) 21 日から 7 日の間。 MRI は、空き状況に応じて、11.7 T Bruker BioSpec スキャナーと 7 T Bruker BioSpec スキャナー (どちらも ParaVision XNUMX ソフトウェアを搭載) を使用して実施されました。外場は解剖学的イメージングにとって重要ではないため、これは結果には影響しませんでした。¹⁴。イメージング実験は、上で説明したのと同じイメージング パラメータと処理を使用して実行されました (腫瘍サイズの追跡）。 11.7 T スキャナの場合、セットアップは受信用のマウス心臓表面コイルと送信用の容積測定コイルで構成されていました。各スライスの腫瘍体積は、腫瘍領域をカバーする手動で描画された対象の体積から決定されました。

統計分析

PET 画像検査では、注入線量のパーセンテージ (% ID) および腫瘍体積あたりの注入線量 (% ID cm) ^{- 3}) 一元配置分散分析を使用して比較しました。グループ間の差異は、Tukey の多重比較検定を使用して決定されました。 RNT セクションの NTV は、 t-対になっていない値のテスト。データ分布は正常であると想定されていましたが、これは正式にテストされていませんでした。統計分析は、GraphPad Prism v.8 を使用して実行されました。

レポートの概要

研究デザインの詳細については、 ネイチャー ポートフォリオ レポートの概要 この記事にリンクされています。

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• 情報源： https://www.nature.com/articles/s41565-023-01577-y