نواقل العلاج الجيني AAV والتحديات التي تطرحها تحييد الأجسام المضادة
لقد تطور الاهتمام بمجال الطب التجديدي بشكل كبير في السنوات الأخيرة. على سبيل المثال ، أفاد التحالف من أجل الطب التجديدي عن استثمار ما يقرب من 20 مليار دولار أمريكي في عام 2020 تم تقسيمه على العلاج بالخلايا والعلاج الجيني وعلاج الأورام المناعي المستند إلى الخلايا وعلاج الأنسجة ، مع العلاجات الجينية وحدها التي تحتوي على أكثر من 400 منتج في التجارب السريرية في عام 2020 [
]. العلاج الجيني كنهج يعالج أو يمنع المرض عن طريق تعديل الجينات الأساسية. يمكن أن يشمل ذلك تعديل أو إصلاح أو استبدال الجين المعيب لتوفير نمط ظاهري فعال. أظهر العلاج الجيني نتائج واعدة في منع أو علاج بعض الموروثات اضطرابات أحادية المنشأ (انظر قاموس المصطلحات) مثل الهيموفيليا ومرض فقر الدم المنجلي وداء ليبر الخلقي [
]. AAVs عبارة عن فيروسات صغيرة غير مغلفة وغير مؤهلة للنسخ المتماثل إلا في وجود فيروس غدي أو هربس مساعد []. لا ترتبط AAVs من النوع البري بأي مرض بشري معروف [
]. هذا النقص في الإمراضية ، جنبًا إلى جنب مع القدرة على توصيل ما يصل إلى 4.8 كيلو بايت تقريبًا من الحمض النووي أحادي الجديلة (ss) إلى مجموعة من أنواع الأنسجة المختلفة التي تجعلها ناقلًا جذابًا لتقديم العلاج الجيني [
تسلسل النوكليوتيدات للتكرار الطرفي المقلوب في الحمض النووي للفيروس المرتبط بالغدة.
].
يوجد حاليًا أكثر من 260 تجربة سريرية جارية تستخدم AAV كناقل للجينات (تجارب سريرية للعلاج الجيني في جميع أنحاء العالم مقدمة من جورنال أوف جين ميديسين ، وايلي ؛ https://www.abedia.com/wiley()الشكل 1, الشكل 2). الميزة التي تتمتع بها AAVs مقارنة بالنواقل الفيروسية الأخرى ، مثل الفيروس البطيء ، هي أنها تتفاعل بشكل ضئيل مع الجهاز المناعي الفطري ، مما يدل على انخفاض السمية والاستجابات الالتهابية [
فعالية وسلامة النواقل الفيروسية المرتبطة بالغدة بناءً على النمط المصلي 8 و 9 مقابل ناقلات الفيروسة البطيئة للعلاج الجيني للهيموفيليا ب.
]. سريريًا ، لا يتم ملاحظة أي استجابات حادة بشكل نموذجي.
AAV النمط المصلي يتم الحفاظ على مورفولوجيا القفيصة بشكل كبير عبر قفيصة المؤتلف والبرية من النوع ؛ لذلك ، ناجحة التوضيح يتأثر بشكل كبير بالتعرض السابق لجهاز المناعة لـ AAVs الذي يحدث بشكل طبيعي [
انتشار IgG في الدم والعوامل المعادلة ضد أنواع الفيروسات المرتبطة بالغدة (AAV) 1 و 2 و 5 و 6 و 8 و 9 في السكان الأصحاء: الآثار المترتبة على العلاج الجيني باستخدام نواقل AAV.
]. الاستجابة المناعية للعلاجات AAV هي صورة معقدة وخارج نطاق هذه المراجعة. للحصول على مراجعات مفصلة ، يرجى الاطلاع على [
الاستجابات المناعية البشرية لناقلات الفيروسات المرتبطة بالغدة (AAV).
]. باختصار ، بمجرد استيعاب الفيروس ، يتم نقله عبر الالتقام الخلوي إلى النواة ، حيث تسعى البروتينات القفيصة للدخول. يتم بعد ذلك إزالة الفيروس ويتم تحويل ssDNA إلى DNA مزدوج الشريطة (ds) ، وفي حالة العلاج الجيني العلاجي ، يتم بعد ذلك التعبير عن الجينات المحورة ذات الصلة. بعد التحويل ، يتم تكسير بروتينات كابسيد AAV في البروتيازومات ، مما يسمح بمعالجة الببتيدات لجزيئات عرض مستضد معقد التوافق النسيجي الأول من الفئة الأولى ومعقد التوافق النسيجي الكبير من الدرجة الثانية التي تبدأ استجابات الخلايا التائية التي تؤدي إلى تنشيط الخلية البائية وإنتاج مضاد إف آي جي /تحييد الأجسام المضادة (NAbs) (الشكل 3) ؛ بعد ذلك ، يتم تحضير الجهاز المناعي لمحاربة عودة العدوى باستخدام AAV ، ويعمل بشكل أساسي كلقاح ضد إعادة إعطاء العلاج إذا لزم الأمر ويقلل من كفاءة التنبيغ العلاجي.
أظهرت المتابعة طويلة الأمد لواحد من علاجات الجينات الناقلة الأولى لـ AAV في عام 2020 فعالية مستمرة في علاج الهيموفيليا B لدى الذكور البالغين. بعد خمسة عشر عامًا من الإعطاء ، لم تتم ملاحظة أي مخاوف كبيرة تتعلق بالسلامة ؛ ومع ذلك ، فقد سلطت الدراسة الضوء على NAbs ذات العيار العالي المستمر للنمط المصلي AAV2 المعطى علاجيًا ، ومع بعض التفاعل التبادلي ، معادلة AAV5 و AAV8 [
متابعة طويلة الأمد لأول عملية تسليم داخل الأوعية البشرية لـ AAV لنقل الجينات: AAV2-hFIX16 للهيموفيليا الشديدة B.
]. على الرغم من نجاحها بلا شك ، وتسليط الضوء على AAVs كخيار جذاب لناقلات العلاج الجيني ، إلا أن وجود NAbs عالي العيار لا يزال مصدر قلق لأنه يعيق فعالية الجرعات المستقبلية ويقلل بشكل كبير من عدد المرضى الذين يمكن أن يعالجهم العلاج بشكل فعال.
انتشار IgG في الدم والعوامل المعادلة ضد أنواع الفيروسات المرتبطة بالغدة (AAV) 1 و 2 و 5 و 6 و 8 و 9 في السكان الأصحاء: الآثار المترتبة على العلاج الجيني باستخدام نواقل AAV.
انتشار النمط المصلي المضاد للفيروس المرتبط بالفيروس 8 معادل للأجسام المضادة والمواد المناعية المتفاعلة أريل سلفاتاز ب في مرضى عديد السكاريد المخاطي السادس المرشحين لتجربة العلاج الجيني.
الأجسام المضادة المرتبطة بالفيروس الغدي في مجموعة مرضى الهيموفيليا في المملكة المتحدة: دراسة الانتشار المصلي لوجود الأنماط المصلية لناقلات الفيروس المرتبطة بالفيروس الغدي AAV 5 و AAV 8 معادلة النشاط والأجسام المضادة في مرضى الهيموفيليا A.
]. بالمثل ، على الرغم من أن نواقل AAV أظهرت ثباتًا طويل الأمد في بيئة سريرية [
توسط تقييم الفيروس المرتبط بالغدة في التعبير طويل الأمد عن تشانيل رودوبسين -2 في شبكية الفأر.
] ، بسبب طريقة العمل غير التكاملي ، من الممكن أن تكون هناك حاجة لجرعة إضافية لاحقًا في حياة المريض لضمان المستويات العلاجية للتعبير الجيني. إن العثور على طريقة أو تقنية آمنة وفعالة للتغلب على تحييد AAV والتهرب منه بواسطة الجهاز المناعي سيسمح بتقديم علاج جيني علاجي فعال وناجح مع فائدة علاجية مدى الحياة لأكبر عدد ممكن من المرضى.
لقد ثبت أن وجود مضادات AAV NAbs عند التتر المنخفض يقلل من التعبير الجيني الناجح [
تحييد الأجسام المضادة ضد الفيروس المرتبط بالغدية فحص مستقبليًا في مرضى الأطفال المصابين بالهيموفيليا.
] ، مما يحد بشكل كبير من مجموعة المرضى التي يمكن للعلاجات علاجها. ستسمح التكنولوجيا الناجحة المثالية بعلاج المرضى المصابين بالمصل مع تثبيط الاستجابة المناعية للناقل والسماح بإعادة الإدارة في المستقبل. في نفس الوقت ، مثالي المناعة من الأساليب التي تمت مراجعتها مؤخرًا في [
التغلب على التحديات التي تفرضها المناعة الخلطية على نواقل AAV لتحقيق نقل جيني آمن وفعال في المرضى المصابين بالمصل.
] وتلخيصها في الشكل 4، تتطلب ملف مزايا / مخاطر مواتية.
على الرغم من كونه منخفض المناعة مقارنة بالفيروسات الأخرى ، فإن جهاز المناعة ، الذي تطور ليكون مضبوطًا بدقة للاستجابة لمسببات الأمراض ، يتعرف على نواقل AAV على أنها تحدٍ للجهاز المناعي ، وبالتالي يسلط الضوء على وجود قيود مهمة على نواقل العلاج الجيني هذه. هناك الآن بيانات متزايدة تدل على أن الجرعات عالية النواقل والجرعات التي تحتوي على كبسولات فارغة زائدة أظهرت سمية تعتمد على الجرعة [
معالجة السمية عالية الجرعات من AAV - "واحد وانتهى" أو "أبطأ وأقل" ؟.
].
في هذه المراجعة ، نركز على التقنيات الحالية والناشئة في هذا المجال للتغلب على الاستجابة المناعية والتهرب منها ، مما يمكّن العلاج الجيني بوساطة AAV من تحقيق إمكاناته ، وتقديم العلاج العلاجي مدى الحياة للمرضى الذين يعانون من اضطرابات أحادية الجين.
تلافي الاستجابة المناعية وعلاج المصابين بالمصل
في الأنسجة المتميزة بالمناعة مثل العين ، لوحظ تأثير ضئيل أو معدوم للاستجابة الخلطية الموجودة مسبقًا بعد إعطاء الناقلات وكان من الممكن تكرار العلاج على العين المقابلة [
إعادة العلاج الجيني AAV2 في ثلاثة بالغين يعانون من العمى الخلقي.
]. من الواضح أن هذا لا ينطبق على طرق الإدارة الأخرى للأنسجة المستهدفة ، خاصةً عندما يتم جرعات ناقلات AAV بشكل نظامي. ومع ذلك ، فإن النهج الذي يركز على تجنب اتصال AAV مع NAbs له فوائد. تم إجراء مثال ناجح لنهج التهرب هذا من خلال حقن AAV8 في فرع الوريد البابي عبر قسطرة البالون التي سمحت بنقل خلايا الكبد في وجود NAbs ذات العيار المنخفض. على الرغم من أنه لا ينطبق في وجود NAbs ذات العيار الأعلى ، ولم يتم تطبيقه حتى الآن في أنسجة أخرى غير الكبد ، فمن المشجع أن تجنب NAb المحلي يمكن أن يكون مناسبًا في بعض حالات استهداف الأنسجة.
نهج إضافي يسمح بالتنبيغ في المرضى المصابين بالمصل هو تشبع NAbs بالمستضدات. تتمثل إحدى الطرق الممكنة لذلك في إعطاء كبسولات فارغة / شرك أو جرعة ناقلات عالية ، مما يسمح أساسًا للـ NAbs بالارتباط ، بينما تظل جرعة علاجية فعالة من النواقل متاحة لتحويل الخلايا. في الفئران ، يكون إعطاء فائض بمقدار 50 أو 100 ضعفًا من الكبسولات الفارغة كافياً للحصول على تحويل كامل للكبد في وجود عيار 1:10 و 1: 100 NAb. في ظل وجود عيار عالي جدًا (> 1: 3000) ، لا يمكن استرداد التحويل [
التغلب على المناعة الخلطية الموجودة مسبقًا ضد AAV باستخدام الأفخاخ القفيصة.
]. هذا النهج يزيد بشكل كبير من الجرعة المطلوبة وتكاليف التصنيع المرتبطة بها وكذلك العبء المناعي.
تتمثل إحدى طرق زيادة عدد المرضى الذين يمكن علاجهم في تحديد النمط المصلي AAV حيث يكون معدل الانتشار المصلي NAb منخفضًا. في فحص 888 عينة مصل بشري من عشرة بلدان ، لاحظ كالسيدو وويلسون أن AAV2 NAbs كان الأكثر انتشارًا ، يليه AAV1 و AAV7 و AAV8 [
]. من الواضح أنه حيثما تسمح انتفاخات الأنسجة ، فإن اختيار النمط المصلي المتجه مهم. ومع ذلك ، حتى بالنسبة للأنماط المصلية الأقل مناعة ، هناك العديد من الحالات الموثقة للاستجابة المناعية الموجودة مسبقًا [
انتشار IgG في الدم والعوامل المعادلة ضد أنواع الفيروسات المرتبطة بالغدة (AAV) 1 و 2 و 5 و 6 و 8 و 9 في السكان الأصحاء: الآثار المترتبة على العلاج الجيني باستخدام نواقل AAV.
انتشار النمط المصلي المضاد للفيروس المرتبط بالفيروس 8 معادل للأجسام المضادة والمواد المناعية المتفاعلة أريل سلفاتاز ب في مرضى عديد السكاريد المخاطي السادس المرشحين لتجربة العلاج الجيني.
الأجسام المضادة المرتبطة بالفيروس الغدي في مجموعة مرضى الهيموفيليا في المملكة المتحدة: دراسة الانتشار المصلي لوجود الأنماط المصلية لناقلات الفيروس المرتبطة بالفيروس الغدي AAV 5 و AAV 8 معادلة النشاط والأجسام المضادة في مرضى الهيموفيليا A.
تحييد الأجسام المضادة ضد الأنماط المصلية 1 و 2 و 6 و 9 في مصل نماذج حيوانية شائعة الاستخدام.
].
علاوة على ذلك ، مع زيادة فهم بنية قفيصة ناقل AAV والتشكل ، فقد أتاح الفرصة لاستخدام التطور الموجه لتوليد ناقلات AAV جديدة ومهندسة والتي لن يكون هناك تعرض سابق لها في السكان [
]. كان لهذا النهج فعالية متنوعة اعتمادًا على موقع طفرات القفيصة. من الممكن أيضًا أن تؤدي هذه الطفرات إلى تغيير انتفاخ الأنسجة وتقليل الانتقال في النهاية [
يحمي اقتران PEG بشكل معتدل النواقل الفيروسية المرتبطة بالغدة ضد تحييد الأجسام المضادة.
]. يتمثل التحدي المتمثل في هذه التعديلات في التحكم في موقع تفاعل التفعيل. يمكن التغلب على ذلك باستخدام أدوات توسيع الشفرة الجينية ، مما يسمح بإدخال الأحماض الأمينية غير الطبيعية في الكابسيد في مواقع محددة [
استراتيجية كيميائية دقيقة لتغيير خصوصية مستقبلات الفيروس المرتبط بالغدية.
] ، والذي تم استخدامه لتمكين PEGylation الخاصة بالموقع والتي تظهر انخفاضًا في التعرف على الجسم المضاد المختبر وانخفاض الاستجابة المناعية في نموذج الفئران [
فيروسات الغدة الدرقية المرتبطة بالموقع مع زيادة استقرار المصل وانخفاض المناعة.
]. بينما يقلل PEGylation الاستجابة الخلطية ، لا يزال AAV خاضعًا لمناعة خلوية ؛ للتغلب على هذا ، هناك احتمال لاقتران المواد المثبطة للمناعة مع ناقلات AAV. كما يتضح من الفسفوسرين zwitterionic المثبط للمناعة (PS) - الذي يحتوي على عديد ببتيد مترافق مع AAV8 ، والحفاظ على كفاءة التحويل وتروب الأنسجة الأصلي وقمع إنتاج مضادات AAV في نموذج الفأر [
التخفيف من مناعة العلاج الجيني بوساطة AAV مع الببتيد zwitterionic المثبط للمناعة.
] فتح طريقًا لقمع المناعة الموضعي المستهدف ، مما أدى إلى إزالة خطر الإصابة المتزايد بالقمع الجهازي التقليدي.
هناك طريقة أخرى ممكنة لمنع المعادلة جسديًا من NAbs وهي ربط AAV بالحويصلات المجهرية / exosomes (vexosomes). للقيام بذلك ، يتم تعديل إنتاج ناقلات AAV بحيث ترتبط النواقل الناتجة مع سطح وداخل الحويصلات الدقيقة ، وبالتالي إنتاج فيكسوسومات [
ناقل AAV المرتبط بالحويصلة الدقيقة كنظام توصيل جيني جديد.
]. تم إجراء ذلك عن طريق تكوير الحويصلات الدقيقة المرتبطة بـ AAV عن طريق الطرد المركزي التفاضلي لمفاعل إنتاج المفاعل الحيوي. على الرغم من أن الآلية التي ينتقل بها AAV المرتبط بالحويصلة الدقيقة من سطح الخلية إلى النواة غير معروفة ، فقد تمكنوا من نقل الخلايا بنجاح في وجود تركيز قوي من NAbs (1: 2000) ، أعلى بكثير مما يُرى عادةً في المرضى. على الرغم من أن عدادات NAb العالية كانت لا تزال قادرة على منع التنبيغ ، إلا أن مقاومة التحييد التي أظهرتها AAVs المرتبطة بالحويصلة واعدة [
متابعة طويلة الأمد لأول عملية تسليم داخل الأوعية البشرية لـ AAV لنقل الجينات: AAV2-hFIX16 للهيموفيليا الشديدة B.
]. على الرغم من أنها واعدة ، إلا أن الصورة الكاملة لمدى استمرار التنبيغ غير واضحة وقد تختلف اعتمادًا على النسيج المستهدف وعمر المريض المعالج. أيضًا ، في بعض الأمراض القادرة على خفض متوسط العمر المتوقع بشكل كبير عند عدم علاجها ، قد يتطلب الأمر علاجًا مبكرًا في الحياة [
التطور قبل السريري لناقل AAV8-hUGT1A1 لعلاج متلازمة كريغلر-نجار.
]. في هذه الحالات ، قد تكون هناك حاجة إلى إعادة إدارة الناقل في المستقبل.
عند التفكير في إعادة إعطاء ناقلات الأمراض والوقاية من جيل NAb ، ربما يكون النهج الأكثر استعدادًا سريريًا هو استخدام استراتيجيات قمع المناعة المشابهة لتلك المستخدمة في رفض مضادات الزرع [
]. ومن فوائد ذلك أنه يستخدم العلاجات والأدوية المعتمدة بالفعل والتي يمكن اختيارها بناءً على مكونات الجهاز المناعي المستهدفة (الجدول 1). أظهر مزيج من ciclosporin A ومثبط الكالسينيورين الذي يخفض نشاط الخلايا التائية وريتوكسيماب الذي يستهدف الخلايا البائية انخفاضًا في NAbs مما يسمح بإعادة إدارة الناقل في نموذج الرئيسيات غير البشرية (NHP) [
الانتشار والتعديل الدوائي للمناعة الخلطية لنواقل AAV في نقل الجينات إلى النسيج الزليلي.
]. نظرًا لأن ريتوكسيماب غير قادر على استهداف خلايا البلازما ، التي لا تعبر عن مستضد CD20 مباشرة ، فإنه لا ينطبق على أولئك الذين لديهم مناعة موجودة مسبقًا [
فعالية AAV8-hUGT1A1 مع الرابامايسين في الفئران حديثي الولادة والرضع والأحداث لنمذجة العلاج في مرضى الجهاز العصبي المركزي عند الأطفال.
]. علاوة على ذلك ، عند صياغته في الجسيمات النانوية ، أظهر الراباميسين فعالية أكبر في النماذج قبل السريرية في تقليل NAbs والسماح بإعادة إعطاء الناقل في نموذج الرئيسيات [
يتيح التعديل الانتقائي للمستضد لمناعية AAV مع الجسيمات النانوية للراباميسين المتحملة للتسامح إعادة الإدارة الناجحة للناقل.
]. تبدو هذه الأساليب واعدة ، لا سيما لإعادة الإدارة لمرضى السلبيين سابقًا. كما هو الحال مع ريتوكسيماب والتدخلات الدوائية الأخرى غير فعالة في جلب أولئك الذين تعرضوا سابقًا لـ wt-AAV إلى مجموعة المرضى القابلة للعلاج. يجب أن تكون النماذج الحيوانية التي تمت دراستها سلبيًا لتبدأ.
لسوء الحظ ، تترافق جميع أشكال كبت المناعة مع زيادة خطر الإصابة بالعدوى. بالاقتران مع العلاجات المصممة لعلاج المرضى المحتمل إصابتهم بأمراض مزمنة بالفعل ، يجب توخي الحذر الشديد عند الحكم على تحليل المخاطر والفوائد لقمع المناعة مقابل التطبيق العملي للعلاج الجيني.
كما هو الحال مع جميع المقايضات بين المخاطر والفوائد ، يجب النظر في السبل التي يمكن من خلالها تقليل المخاطر ؛ في هذه الحالة ، قد يكون من الممكن اعتماد نهج أكثر استهدافًا لقمع المناعة. على سبيل المثال ، تم تحديد المستقبلات الشبيهة بـ Toll (TLRs) على أنها تلعب دورًا في التعرف على AAV والاستجابة المناعية اللاحقة ، وتم تحديد بروتين MyD88 كمنظم مهم لكل من المناعة التكيفية للخلايا T و B ضد AAV [
تنظم إشارات MyD88 في الخلايا البائية إنتاج الأجسام المضادة المعتمدة على Th1 لـ AAV.
]. تمكّن تقنية CRISPR-Cas9 النظام الأساسي من تقليل تنظيم ملفات MyD88 الجين ، يثبط الاستجابة المناعية لفترة وجيزة ، مما يسمح بإدارة الناقل وبالتالي تقليل مستوى NAbs المتولد استجابةً عند ملاحظته في نموذج الفأر [
التعديل المناعي الاصطناعي باستخدام كريسبر فائق القمع في الجسم الحي.
]. لأن هذا يقلل من الاستجابة المناعية ، فإنه لا يسمح بعلاج المرضى المصابين بالمصل. ومع ذلك ، قد يسمح بإعادة إدارة الناقل في المستقبل ويمكن استخدامه بالاقتران مع ناقلات النمط المصلي الجديدة أو تلك التي لديها انتشار أقل لـ NAbs.
التخفيض المؤقت لـ NAbs
تعد إزالة NAbs مؤقتًا من الأنسجة المستهدفة قبل جرعات الناقل خيارًا لكل من المرضى الموجودين بالمصل وإعادة إدارة النواقل. البلازما هي تقنية خارج الجسم تسمح بإزالة المواد من البلازما. يُسحب الدم ويتم تبادل البلازما وتصفيتها لإزالة الأجسام المضادة الحرة والمركبات المناعية المنتشرة من البلازما ، والتي يمكن إعادة تسريبها. كانت الدورات المتعددة لفصادة البلازما جنبًا إلى جنب مع كبت المناعة قادرة على تقليل مستويات IgG في المصل بشكل كبير [
مستويات مصل IgG و IgM في المتبرعين الجدد والمنتظمين لفصادة البلازما على المدى الطويل.
]. في دراسة أجريت على عشرة مرضى إيجابيي المصل لـ AAV1 و 2 و 6 و 8 ، قلل ما يصل إلى خمس دورات من فصادة البلازما من عيار NAb في بعض المرضى إلى أن لا يمكن اكتشافه (
تقرير حالة 10 مرضى حول تأثير فصادة البلازما على معادلة العوامل ضد أنواع الفيروسات المرتبطة بالغدة (AAV) 1 و 2 و 6 و 8.
] ، والتي من شأنها أن تسمح بعلاج المرضى المصابين بالمصل وإمكانية توصيل الناقل مرة أخرى إذا لزم الأمر في المستقبل. كانت دورتان من فصادة البلازما كافية لتقليل مستويات NAb في نموذج NHP ، مما يتيح نقلًا ناجحًا يمكن مقارنته مع الحيوانات المصليّة [
تقضي فصادة البلازما على التأثير السلبي للأجسام المضادة لـ AAV على التعبير الجيني للميكروديستروفين بعد الولادة الوعائية.
] ، مما يدعم الفرضية القائلة بأن فصادة البلازما قد تسمح بعلاج ناجح في المرضى الذين لديهم مناعة موجودة مسبقًا.
ومع ذلك ، يتطلب هذا النهج تحليلًا للمخاطر والفوائد مشابهًا للتحليل الذي تمت مناقشته بشأن كبت المناعة ، مع خطر استنفاد جميع IgGs بشكل غير محدد ، والعبء المرتبط بدورات متعددة من فصادة البلازما يجعل المريض في النهاية أكثر عرضة للعدوى.
المتابعة المنطقية لذلك هي تطوير عمود الامتصاص المناعي الخاص بـ NAb لفصادة البلازما (الشكل 5). أظهرت الدراسات الأولية ارتباطًا انتقائيًا واعدًا بـ NAbs من مصل الدم باستخدام جزيئات AAV الكاملة كروابط ، مقترنة بمرحلة كروماتوغرافيا ثابتة. يقلل AAV المعطل من عيار NAb وتم تحقيق نقل الكبد الفعال في نموذج فأر محصن سلبي [
نقل ناجح مع ناقلات AAV بعد الاستنفاد الانتقائي للأجسام المضادة لـ AAV عن طريق الامتصاص المناعي.
]. يتمثل أحد التحديات الكبيرة التي تواجه تطوير هذه الأدوات في أن NAbs عبارة عن مجموعة سكانية متعددة النسيلة ، والتي تختلف من النمط المصلي إلى النمط المصلي وبين مجموعات المرضى المختلفة. قد تختلف كفاءات الربط لبعض NAbs في AAV المجاني مقابل AAV المثبت. ومع ذلك ، فإن هذا النهج واعد للغاية ، ولكنه يتطلب النظر في كثافة اقتران الترابط مقابل السعة ، ودورات إعادة استخدام الراتنج ، وتسرب الترابط لضمان الجدوى والتوسع في النماذج الحيوانية الأكبر ثم البشر.
بديل واعد لنضوب IgG عن طريق فصادة البلازما هو استخدام endopeptidase imlifidase (IdeS). تمت الموافقة على هذا الدواء على أنه آمن وفعال ويستخدم لزرع الكلى في المرضى الذين لديهم حساسية من HLA. يقلل Cleaving IgG من عيار NAb دون الحاجة إلى إزالة بلازما المريض وإعادة استخدامها [
تحسين نظام معالجة إنزيم IgG المهين من أجل تحسين نقل الفيروس المرتبط بالغدية في وجود الأجسام المضادة المعادلة.
]. في المختبر أظهرت الاختبارات التي أجريت على البلازما البشرية أيضًا هضم IgG ، مما يقلل التتر المضاد لـ AAV8 حتى في وجود الأجسام المضادة لـ IdeS المنتشرة في البشر [
يُمكّن إندوبيبتيداز IgG-cleaving في الجسم الحي العلاج الجيني في وجود الأجسام المضادة المضادة لـ AAV.
]. كما هو الحال مع فصادة البلازما غير المحددة ، فإن هذا النهج يستنفد كل IgG بشكل عشوائي مما يزيد من خطر العدوى ؛ ومع ذلك ، فقد تم إثبات الأمان بالفعل في المرضى الذين خضعوا لعمليات الزرع. لذلك ، على الرغم من أنه لا يخلو من المخاطر ، فإن IdeS يوفر نهجًا أقل توغلًا من فصادة البلازما.
ملاحظات ختامية
من الواضح أن التقنيات للتغلب على الاستجابات المناعية الخلطية ضرورية إذا كان العلاج الجيني AAV سيكون مفيدًا لأكبر عدد ممكن من المرضى. أظهرت الأساليب الحالية لعلاج المرضى السلبيين فقط واستهداف المرضى المتمتعين بالمناعة إمكانات هذه العلاجات ولكن فقط لجزء صغير من المرضى والمؤشرات المحتملة. يعد تجنب التفاعلات الأولية مع NAbs من خلال كبسولات معدلة كيميائيًا ووراثيًا واعدًا للجرعات الأولية. ومع ذلك ، فمن المحتمل أن يتم التعرف على الناقل بواسطة NAbs في المستقبل ، مما يمنع جرعة ثانية ، وبما أن الحقل لا يزال في مهده النسبي ، يبقى سريريًا أن نرى ما إذا كان هذا مطلوبًا أو ما إذا كان من المتوقع التعبير عن الجينات المعدلة مدى الحياة. يبدو أن فصادة البلازما جنبًا إلى جنب مع كبت المناعة خيار معقول لكثير من الحالات ؛ ومع ذلك ، فإن استنفاد جميع IgGs وقمع المناعة على نطاق واسع يجلب مخاطر إكلينيكية. لذلك ، من الواضح أن هناك حاجة إلى طريقة لاستنفاد NAbs على وجه التحديد عن طريق قمع المناعة المستهدف ، أو فصادة البلازما ، أو وسائل أخرى. لكي يصل العلاج الجيني بوساطة AAV إلى إمكاناته الكاملة ، يلزم مزيد من الفهم في مجالات محددة (انظر الأسئلة البارزة). يتمثل أحد المخاوف في أن NAbs التي تم تطويرها قد تختلف في هيكلها من مريض لآخر ، مما يجعل تطوير عمود NAb تحديًا ، وعلى الرغم من أن استخدام IdeS واقتران AAV إلى شقوق مثبطة للمناعة تعد مناهج ناشئة واعدة ، إلا أن التقنيات الواعدة السابقة تظهر أنه لا يزال يتعين القيام بذلك. رأينا كيف ستنتقل هذه النماذج من الحيوانات إلى البشر. ومع ذلك ، فإن المعدل الذي زاد فيه فهم الاستجابة المناعية لنواقل AAV خلال السنوات الأخيرة جنبًا إلى جنب مع فهم النواقل واعد ، مما يسمح بطرق أكثر تطوراً للتغلب على تحييد AAV والتهرب منه لتطوير وتقديم علاجات مغيرة للحياة في نهاية المطاف للمرضى الذين يحتاجون إليها.