Kimyasallar ve malzemeler

Hidrojen tetrakloroaurat trihidrat, gümüş nitrat, ditiobis (süksinimidil propiyonat), 11-merkaptoundekanoik asit (MUA) ve MMC, Sigma-Aldrich'ten satın alındı. Analitik dereceli askorbik asit, MP Biomedicals'tan elde edildi. 1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidroklorür ve N-hidroksisülfosüksinimid, Thermo Fisher Scientific'ten temin edildi. Nanopartikülleri sentezlemek için ultra saf su (18.2 MΩ cm- ) üretmek için bir Milli-Q su sistemi kullanıldı. Abbott'tan (ARTG #345192) ve SD Biosensor'dan (ARTG #345219) satın alınan ticari olarak temin edilebilen iki LFA ürünü, sağlayıcıların talimatları izlenerek klinik numuneleri test etmek için kullanıldı.

SpyCatcher, SpyTag ve SCV2 RBD–mNeonGreen füzyon proteinlerinin üretimi

SpyCatcher ve SpyTag'i üretmek için SpyCatcher–MatterTag ve EGFP-SpyTag füzyonları, sırasıyla sert bir bağlayıcı (AEAAAKEAAAKEAAAAKA) ve esnek bağlayıcı (GGGS) aracılığıyla tasarlanmıştır. Kimerik genler ticari olarak sentezlendi ve pCDNA3.1 vektörüne klonlandı. Füzyon proteinleri, üreticinin talimatlarına göre (Thermo Fisher Scientific) ExpiCHO-S hücrelerinde ifade edildi. Saflaştırma için, filtrelenmiş süpernatan, bir saflaştırma tamponu (4 mM Tris-HCl (pH 100), 8.0 mM NaCI) ile dengelenmiş bir Strep-Tactin 150Flow kolonuna (IBA Lifesciences) yüklendi. Sütun daha sonra 50 sütun hacminde saflaştırma tamponu ile yıkandı. Füzyon proteini, 50 mM biotin (IBA Lifesciences) içeren bir saflaştırma tamponu ile yıkandı. Saflaştırılmış proteinlerin saflıkları, sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezinde analiz edildi. SCV2 – mNeonGreen füzyon proteininin ifadesi ve saflaştırılması başka bir yerde açıklanmıştır.².

Maya hücrelerinin mühendisliği ve çok işlevli SynBioNF'lerin üretimi

EBY100 maya hücreleri, (1) W25–MatterTag, (2) Sb68–SpyTag, (3) Sb68–MatterTag, (4) Nb21–StrepTag, (5) dahil olmak üzere hücre duvarlarında sekiz farklı fonksiyonel füzyon proteini görüntülemek için kullanıldı. –SpyTag, (21) Nb6–MatterTag, (21) DD7–MatterTag ve (7) DD8–SpyTag. Bu füzyon gen dizileri ticari olarak sentezlendi ve klonlandı (Gene Universal; Ek Veriler 1 ve 2) önceki çalışmayı takip ederek maya yüzeyi gösterimi için pCTCON2 ekspresyon plazmidine². Tasarımımızda, hedef bağlayıcı nanokorlar (Sb68, W25 ve Nb21) ve fonksiyonel peptit etiketleri (MatterTag, SpyTag ve StrepTag), sırasıyla Aga2p'nin N ve C terminallerine kaynaştırıldı. Aga15p'nin N ve C terminallerinde 30 ve 2 amino asitli esnek bir bağlayıcı (GGGGS), kaynaşmış proteinler/peptitler arasındaki sterik engelleri önlemek için kullanıldı. Ayrıca, görüntülenen füzyon proteinlerinin miktarının belirlenmesine izin veren HA ve c-Myc peptit etiketleri, sırasıyla her bir gen yapısının N ve C terminallerine dahil edildi. Aga2p taşıyan füzyon proteinleri, Aga1p ankor proteini ile etkileşerek maya hücre duvarlarında immobilize olabilmiştir.

Füzyon protein görüntüsünü elde etmek için EBY100 maya hücreleri, elektroporasyon kullanılarak bir kare dalganın uyarılması altında rekombinant DNA (10 ul, 1,000 ng) ile inkübe edildi. Üretilen maya hücreleri, SDCAA ortamında kültürlendi ve 600 nm'de (OD600) optik yoğunluk 5-10'a ulaşana kadar izlendi. Maya hücreleri daha sonra SGCAA ortamını içeren galaktoza aktarıldı ve füzyon protein ekspresyonunu indüklemek için OD600 1.0'a seyreltildi. 48 saatlik kültürün ardından, maya hücreleri toplandı ve aşağıda açıklandığı gibi bir akış sitometrisi analizi gerçekleştirerek füzyon proteini ekspresyonunu doğruladı.

SynBioNF'lerin hazırlanması için, füzyon proteinleri sergileyen maya hücreleri, SGCAA ortamından (50 mi, OD600, 6-10) toplandı ve santrifüjleme yoluyla (2,000x) PBS ile yıkandı.g, 10 dakika), ardından EDTA'lı (tablet başına 10 mi) bir proteaz inhibitör kokteyli ile takviye edilmiş PBS içinde yeniden süspanse edildi. Maya hücrelerinin mekanik parçalanması, aşağıdaki koşulları beş kez tekrarlayarak, 505 mm uç çapına ve 3 mm uzunluğa sahip bir sonikatör (Sonics ultrasonik işlemci VC-171) kullanılarak ultra yüksek yoğunlukta gerçekleştirildi: %40 genlik; 1 dakika boyunca 1 s AÇIK ve 2 s KAPALI darbe. Son olarak, SynBioNF'ler santrifüjleme (2,500xg, 15 dakika) süpernatant ürünleri topladı ve bir filtre ünitesi (100 nm, Millipore) ile saflaştırdı.

Füzyon proteinlerinin akış sitometrisi profili

Füzyon protein ekspresyonuna sahip maya hücreleri (10⁷ hücreler ml^-1) toplandı ve santrifüjleme (0.1x) yoluyla %500 sığır serum albümini (BSA) (1,500 ul) içeren PBS kullanılarak yıkandıg, 4 dakika) 4 °C'de. Maya yüzey proteininin etiketlenmesini sağlamak için maya hücreleri, DyLight 650 (1:100 seyreltme) ve RBD-mNeonGreen ile etiketlenmiş anti-Myc antikoru veya anti-dang NS1 proteini ve ardından PE ile etiketlenmiş anti-His antikoru ile inkübe edildi. (1:100 seyreltme) %0.1 BSA (100 µl) içeren PBS içinde döndürülerek ve ışıktan uzakta 4 °C'de 1 saat süreyle. İşaretli maya hücreleri santrifüjlendi (1,500xg, 4 dakika) ve %0.1 BSA (500 ul) içeren PBS ile yıkandı, ardından test için %0.1 BSA (500 ul) içeren PBS içinde yeniden süspanse edildi. Anti-Myc veya anti-His, anti-dang NS1 antikoru ve RBD-mNeonGreen kullanılmadan maya hücresi kontrolleri aynı protokolle hazırlandı. Elde edilen maya hücreleri, iki lazer (488 ve 633 nm) ve iki bant geçiren filtre (525/40 ve 660/20 nm) kullanılarak akış sitometri profiline (CytoFLEX, Beckman Coulter) tabi tutuldu. Veriler, CytExpert (2.4.0.28) kullanılarak elde edildi ve FlowJo yazılımı (10.8.1) ile analiz edildi.

Hücre hattı kullanılarak SCV2 kültürü

SCV2, Vero E6 hücrelerinde kültürlendi. Vero E6 hücreleri ilk olarak %2 ısıyla inaktive edilmiş cenin sığır serumu ile desteklenmiş Dulbecco'nun değiştirilmiş Eagle ortamında kültürlendi. Hücreler %70-90 birleştiğinde, viral inokulum Vero E6 hücrelerine aşılandı ve 37 °C'de (%5 COXNUMX) inkübe edildi₂); sitopatik etki gözlendi. SCV2, süpernatanda 4,500x'te santrifüjleme yoluyla toplandıg 10 dakika Virüs, etkisiz hale getirmek için 50 kGy dozunda gama ışınına tabi tutuldu.

Kültürlenmiş SCV2'nin RT-qPCR ölçümü

Kültürlenmiş SCV2 stoğunu ölçmek için RT-qPCR gerçekleştirildi. SCV96 RNA'yı çıkarmak için MagMAX-2 viral RNA izolasyon kiti kullanıldı. Kopya numarasıyla ilgili kalibrasyon eğrisini oluşturmak için gBlock sentetik E gen standartları kullanıldı. Test, aşağıdaki primerlerle AgPath-ID Tek Adımlı RT-PCR ana karışımını kullandı: CoV-E-fwd (5'-AGT ACG AAC TTA TGT ACT CAT TCG TT-3'), CoV-E-R2 (5 '-ATA TTG CAG CAG TAC GCA CAC A-3') ve TaqMan probu (CoV E probu 5'-6-FAM-ACA CTA GCC ATC CTT ACT GCG CTT CG-MGB-3'). SCV2'nin saptanması, bir Applied Biosystems cihazında kalibrasyon için ortalama kullanılarak çiftler halinde gerçekleştirildi. Döngü koşulları, 45 dakika için 10 °C ve 95 dakika için 10 °C, ardından 45 saniye için 95 °C ve 15 saniye için 60 °C'lik 45 döngüdür.

SynBioNF'leri altın-gümüş alaşımlı nanokutularla eşlenik algılama

SynBioNF'lerin altın-gümüş alaşımlı nanokutularla konjugasyonu, SpyCatcher-/SpyTag aracılı kendi kendine montaj yoluyla gerçekleştirildi. SpyCatcher kaplı altın-gümüş alaşımlı nanokutular ilk olarak şu şekilde hazırlandı: önceki çalışmamızın ardından altın-gümüş alaşımlı nanokutular sentezlendi³⁰. Bir mililitre nanokutu 800x'de santrifüjlendig 15 dakika Daha sonra, 10 ul Raman raportör (MMC) ve 2 ul bağlayıcı molekül (MUA), 5 saat boyunca yukarıdaki nanokutularla inkübe edildi. 800×'de santrifüj yaparak serbest MMC ve MUA'yı çıkardıktan sonrag 15 dakika, 10 ul 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidroklorür (10 mM) ve 20 ul NMUA üzerinde karboksil grubunu aktive etmek için -hidroksisülfosüksinimit (10 mM) eklendi. Daha sonra, 0.5 ug SpyCatcher, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca nano kutularla inkübe edildi. SpyCatcher kaplı nanokutular, 800x'de santrifüjleme ile saflaştırıldı.g 15 dakika süreyle ve 200 ul %0.1 BSA içinde yeniden süspanse edildi.

Daha sonra, 30 µl SpyCatcher kaplı nanokutular, 4 µl SynBioNFs (Sb68–SpyTag) (8 µg µl) ile inkübe edildi^-1) 60 ul 10 mM PB, 1 mM PBS ve %1 BSA tamponu içinde 10 dakika süreyle. Nihai ürünler 600×'de santrifüj edilerek toplandı.g 10 dakika süreyle ve %0.1 BSA ile yıkandı.

SynBioNF'lerin ve nanobox biyokonjugatlarının NanoFCM karakterizasyonu

NanoFCM ölçümleri, bir nanoFCM akış NanoAnalyser (NanoFCM) üzerinde gerçekleştirildi. NanoAnalyser ilk önce şirket tarafından sağlanan standart nanopartiküller kullanılarak konsantrasyon ve boyut için kalibre edildi. SynBioNF'lerin boyut dağılımı, kokteyl boyut standardı (yani, farklı çaplara sahip önceden karıştırılmış silika nanopartiküller) ile karşılaştırılarak elde edildi. Altın-gümüş-alaşım-nanobox-konjuge SynBioNF'lerin RBD-mNeonGreen'e karşı floresan profilini çıkarmak için 30.0 µl konjugat, 0.5 µl RBD-mNeonGreen (350 uM) ile oda sıcaklığında 30 dakika süreyle inkübe edildi ve ürünler yıkandı 0.1×'de santrifüj yoluyla %600 BSA ile üç kezg 10 dakika boyunca, ardından 1 dakika boyunca olayları kaydedin. RBD-mNeonGreen ile reaksiyona girmeden aynı miktarda altın-gümüş alaşımlı nanokutu ve SynBioNF'ler eşiği ayarlamak için negatif kontroller olarak kullanıldı.

RBD, SCV2, simüle edilmiş hasta numuneleri ve klinik COVID-19 numunelerinin SynBioNF özellikli SERS tespiti

Altın mikroelektrotlar, 4 inçlik borosilikat cam gofretlerle bir fotolitografi yaklaşımıyla ve önceden belirlenmiş bir protokol izlenerek kurum içinde hazırlandı.³¹. Fotolitografiden sonra gofret, iç çalışma elektrotları (28 mm çap) ve dış karşı elektrot (çap 1.00 mm) ile 0.12 dairesel altın mikroelektrot dizisinden oluşuyordu. Çalışma ve karşı elektrotlar 1 mm ile ayrıldı. Numuneyi altın mikroelektrotlar üzerinde tutmak için gofrete polidimetilsiloksandan yapılmış bir kuyu yapısı iliştirildi. İşlevselleştirmeden önce altın mikroelektrotlar, 1x PBS ile yıkandı. Ardından, SynBioNF'ler (Sb68-MatterTag) altın mikroelektrotlara pipetlendi ve 30 dakika oda sıcaklığında inkübe edildi. Fazla SynBioNF'ler (Sb68–MatterTag), üç kez 1x PBS ile yıkanarak çıkarıldı. Son olarak, altın mikroelektrotlar, oda sıcaklığında 5 saat boyunca 1x PBS içinde %1 BSA ile bloke edildi. Altın mikroelektrotlar kullanılmadan önce 1x PBS ile yıkandı. Hasta numunesinin 30 ul'lik bir karışımı (20 ul numune + 10 ul PBS/%1 Tween-80) daha sonra altın mikro elektrot üzerine pipetlendi ve alternatif akım elektrohidrodinamiği (frekans, 45 Hz; frekans, 500 Hz; genlik, 800 mV). Özellikle PBS/%1 Tween-80 tamponunun hasta numunelerine dahil edilmesi ile virüsün inaktive edilmesi amaçlandı. Tedaviden sonra bulaşıcı olmayan klinik numuneler için (örneğin, gama ışınlaması), numuneler PBS/%1 Tween-80 tamponu kullanılmadan doğrudan platforma uygulanabilir. Daha sonra, altın mikroelektrotları 1x PBS ile yıkadıktan sonra, SynBioNF'lerin (Sb68-MatterTag) biyokonjugatları ve nanokutular, yukarıdaki ile aynı nanomiksaj koşulları altında 20 dakika inkübe edildi. Son olarak, fazla biyokonjugatlar, 1x PBS ile yıkanarak çıkarıldı. Altın mikroelektrotlar daha sonra konfokal Raman eşlemeye (WITec alpha300 R spektrometre) tabi tutuldu ve WITec Suite FIVE yazılımı kullanılarak veriler toplandı/analiz edildi. Spesifik olarak, 632.8 µm × boyutunda görüntüleri taramak için uyarma dalga boyu 20 nm, ×0.05 objektif, elektron çoğaltan şarj çiftli cihaz kamerası, 1 s entegrasyon süresi ve 60 µm adım boyutuna sahip bir He-Ne lazer kullanıldı. 60 mikron

Klinik numune detayları

SCV2-pozitif klinik hasta numuneleri, Patoloji Queensland'deki Molecular Diagnostics Unit tarafından sağlandı ve PBS içinde yeniden süspanse edilmiş nazofaringeal sürüntülerden oluşuyordu. Bu numuneler, pandeminin çok erken dönemlerinde Moleküler Teşhis Biriminde in vitro teşhis RT-qPCR kullanılarak test edildi, oysa teşhis tahlilleri hâlâ tamamen doğrulanıyordu. Negatif ve pozitif numuneler Bulaşıcı Hastalıklar Laboratuvarı, Mikrobiyoloji Önleme Bölümü, Patoloji Queensland tarafından sağlandı ve doğrulanmış BGI platformu kullanılarak test edildi. Hasta numuneleri aşağıdaki etik onay kapsamında toplanmıştır: HREC ref. HAYIR. HREC/2020/QRBW/70461; SCV2 için klinik tanılamayı optimize eden proje başlığı. Bu etik kurul tarafından onaydan feragat etme kararı alındı ​​ve bu çalışma için tazminat uygulanmadı.

SCV2'nin floresan platform tespiti

Altmış mikrolitre SynBioNF (Sb68-MatterTag), altın yüzey üzerinde oda sıcaklığında 2 saat inkübe edildi, ardından serbest SynBioNF'leri çıkarmak için üç kez PBS ile yıkandı. Daha sonra 60 µl numune solüsyonu (yani SCV2 veya ortam kontrolü) yüklendi ve algılama alanı üzerinde oda sıcaklığında 1 saat inkübe edildi. Altın çipler, yakalanmayan hedefleri çıkarmak için üç kez PBS ile yıkandı. Daha sonra, çiplere 50 ul biyokonjugat uygulandı ve 1 saat inkübe edildi. Biyokonjugatları hazırlamak için 500 µl SynBioNF'ler (Nb21–StrepTag) ve 10 µl floresan boncuklar (streptavidin ile kaplanmış), bir Eppendorf tüpünde oda sıcaklığında 1 saat inkübe edildi ve santrifüjleme yoluyla saflaştırıldı. Serbest biyokonjugatlardan kurtulduktan sonra, altın yongaları bir floresan mikroskobu altında görüntülendi. Elde edilen görüntüler daha sonra ImageJ yazılımı (1.53) ile analiz edildi.

SCV2'nin elektrokimyasal tespiti

Altmış mikrolitre SynBioNF (Sb68-MatterTag), ekran baskılı elektrotlar üzerinde oda sıcaklığında 2 saat inkübe edildi. Serbest SynBioNF'leri (Sb68–MatterTag) yıkadıktan sonra, 60 saatlik bir inkübasyon için iç dairesel çalışma elektrotlarına 2 µl numune solüsyonu (yani, SCV1 veya ortam kontrolü) uygulandı ve ardından elektrokimyasal için üç kez PBS ile yıkandı. tespit etme. DPV ölçümü için, 40 µl 2.5 mM [Fe(CN)₆]^3-/[Fe(CN)₆]^4- 1 M KCl içeren 7.4x PBS'de (pH 0.1) redoks çifti, akımı kaydetmek için ekran baskılı elektrotlara eklendi. DPV taraması, –650 ila 0.2 V tarama voltajı, 0.4 mV darbe genliği, 50 ms darbe genişliği, 50 mV potansiyel adımı ve 5 ms darbe periyodu kullanılarak bir elektrokimyasal analiz cihazı CHI 10D (CH Instruments) üzerinde gerçekleştirildi. CV ölçümleri, [Fe(CN) varlığında 10 mM PBS'de yapıldı.₆]^3-/4- redoks sistemi (pH 7.4, 2.5 mM [Fe(CN)₆]^3-/4-). Veriler –0.6 ile 0.6 V arasında 100 mV s tarama hızında kaydedilmiştir.^-1.

SCV2 tespiti için LFA

Yanal akış test şeritleri (genişlik, 7 mm; uzunluk, 80 mm), laminat sırtlı (Cytiva) nitroselüloz HP-80 FF şeritleri ve şeritlerin tepesine eklenmiş orta boy emici pedler kullanılarak hazırlandı. Programlanabilir bir yüksek hızlı şerit kesici (KinBio) kullanılarak çoklu şeritler hazırlandı. Her şerit, 0.2 ul (200 ng) yakalama CR3022 monoklonal antikorlarla lekelendi ve 37 °C'lik bir inkübatörde 15 dakika kurutuldu. CR3022 antikorları, Çin hamsteri yumurtalık hücre kültürü kullanılarak kurum içinde hazırlandı.

Yanal akış şeritleri için numuneler, 0.2 ml'lik ince duvarlı tüplere yerleştirildi ve 37 °C'de 10 dakika inkübe edildi. Daha sonra, PBS içinde SynBioNF'lerin (Nb10–SpyTag) ve küresel altın nanopartiküllerin (SpyCatcher ile kaplanmış) 21 ul biyokonjugatları, 10 ul SCV2 veya orta kontrol ile karıştırıldı. Daha sonra her reaksiyona %1 BSA ve %1 Tween-80 dahil edildi. Her reaksiyon 37 °C'de 15 dakika inkübe edildi. Reaksiyonun tamamı (20 ul), 96 oyuklu bir plakanın oyuklarına bölündü ve test şeritleri, numunelerin 1-2 dakika boyunca şeritlerde dikey olarak yukarı doğru emici pede doğru akmasını sağlamak için oyuklara daldırıldı. Daha sonra kuyucuklara 50 ul PBST (1x PBS + %0.05 Tween-20) eklendi ve tüm biyokonjugatları şeritte yukarı taşımak için 5 dakika daha inkübe edildi. Yakalama hattındaki görsel kolorimetrik reaksiyonlar bir dijital kamera kullanılarak görüntülendi.

Stabilite ve avidite testi için ELISA tabanlı test

ELISA testi için, 10 µg ml^-1 2 x TBS (1 mM Tris (pH 20), 8.0 mM NaCl) içinde seyreltilmiş rekombinant SCV300 RBD proteini, oda sıcaklığında 1 saat boyunca MaxiSorp ELISA plaka oyuklarına kaplandı. Kuyucuklar daha sonra oda sıcaklığında 3.00 saat bloke edici tampon (%0.05 Tween-20 ile TBS içinde %1 BSA) ile inkübe edildi. Daha sonra, her bir oyuğa 100 ul anti-SCV2 RBD SynBioNF'ler (Nb21–SpyTag) (1:5) veya tavşan poliklonal antikoru (1:10,000) eklendi ve 1 saat oda sıcaklığında inkübe edildi. Termal stabilite analizi için SynBioNF'ler veya tavşan poliklonal antikor alikotları, belirtilen sıcaklıkta 1 saat süreyle inkübe edildi ve ardından ilgili oyuklara eklendi. Avidite testi için oda sıcaklığında 100 saat boyunca belirtilen konsantrasyonlarda üre, guanidin hidroklorür, Triton X-1, sodyum dodesil sülfat veya NaCl ilave edildi. Asidik pH koşullarını test etmek için bir sitrik asit ve sodyum fosfat tampon karışımı (pH, 2.6-7.6) kullanıldı. Alkalin pH koşulları için, bir sodyum karbonat ve sodyum bikarbonat tampon karışımı (pH, 9.2-10.8) kullanıldı. Kuyucukların TBST ile beş kez yıkanmasından sonra, HRP-konjuge anti-Myc tag antikoru (%1 BSA-TBST içinde 5,000:3 dilüsyon) veya HRP-konjuge keçi anti-tavşan IgG sekonder antikoru (1:10,000) kuyucuklara eklendi 1 saat için Oyuklar TBST ile yıkandı ve son olarak her bir oyuğa 100 ul TMB substratı ilave edildi ve reaksiyon, 100 ul 1 M sülfürik asit ile durduruldu.

Protein etkileşiminin ölçümü için sekizli deney

Streptavidin sensörleri (ForteBio), 200 dakika boyunca 10 ul 10 mM PBS içinde ön işleme tabi tutuldu. Her kuyucuğa 200 µl solüsyon yüklendi. Tahlil, bir program ayarlanarak gerçekleştirildi: sensörler, ilk temel adımında 120 s boyunca PBS'ye daldırıldı, yükleme numunesinde oyuk başına 75 ug strep RBD ile yüklendi, ikinci temel adımında 120 s boyunca PBS'ye daldırıldı, ilişkilendirme adımında SynBioNF'ler (Nb21–SpyTag) veya çözünür Nb21 nanobody ile 300 saniye boyunca etkileşime girdi ve PBS'de 600 saniye boyunca ayrışma ile sona erdi.

istatistiksel analiz

Klinik örneklerin SERS platformunda SynBioNF tabanlı taramasının tanısal duyarlılığı, özgüllüğü ve doğruluğu, karışıklık matrisine göre belirlendi (Şekil XNUMXa). 6c) aşağıdaki formüllerle:

Duyarlılık = Gerçek pozitif değerlendirmelerin sayısı / Tüm pozitif değerlendirmelerin sayısı = 81/(81 + 3) = %96.43;

Spesifiklik = Gerçek negatif değerlendirmelerin sayısı / Tüm negatif değerlendirmelerin sayısı = 50/(0 + 50) = %100;

Doğruluk = Doğru değerlendirmelerin sayısı / Tüm değerlendirmelerin sayısı = (81 + 50)/(81 + 3 + 0 + 50) = %97.76.

İki kuyruklu t-testler, alıcı çalışma karakteristik eğrisi ve Bland-Altman analizi GraphPad Prism'de (v. 9.2) yapıldı.

Raporlama özeti

Araştırma tasarımı hakkında daha fazla bilgi Doğa Portföyü Raporlama Özeti bu makaleye bağlantılı.

• SEO Destekli İçerik ve Halkla İlişkiler Dağıtımı. Bugün Gücünüzü Artırın.
• EVM Finans. Merkezi Olmayan Finans için Birleşik Arayüz. Buradan Erişin.
• Kuantum Medya Grubu. IR/PR Güçlendirilmiş. Buradan Erişin.
• PlatoAiStream. Web3 Veri Zekası. Bilgi Genişletildi. Buradan Erişin.
• Kaynak: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01415-1