Birincil nöron kültürü hazırlığı

Hayvan dokusunun toplanmasını içeren deney protokolleri, hayvan refahına ilişkin İsviçre federal yasalarına göre Basel-Stadt Kantonu veterinerlik ofisi tarafından onaylandı ve onaylanan yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi. HD-MEA çipleri veya cam lamelleri 70 dakika boyunca %60 etanol içerisinde sterilize edildi ve laminer hava akışı altında steril deiyonize su ile yıkandı. Elektrot dizisi veya lamelleri daha sonra oda sıcaklığında 10 dakika boyunca borat tamponu (Thermo Fisher Scientific) içindeki 0.05 ul %40 (h/h) poli(etilenimin) (Sigma-Aldrich) ile işlendi ve deiyonize su ile yıkandı, ardından 8 ul 0.02 mg ml ile inkübasyon yoluyla^-1 30 °C'de 37 dakika boyunca nörobazal (NB) ortamda (Gibco) laminin (Sigma-Aldrich). E-18 Wistar sıçan embriyoları, kortekslerini toplamak için buz gibi soğuk HBSS'de (Gibco) parçalara ayrıldı ve bunlar daha sonra %0.25 trypsin-EDTA (Gibco) içerisinde ayrıştırıldı. Ayrışmış kortikal hücreler yavaşça ezildi ve tek hücreler elde etmek için 0.45 um'lik bir elekten süzüldü. Hücre yoğunluğu tahmin edildi ve 10 µl 3,000 hücre µl^-1 çözelti elektrot dizisi üzerine kaplandı. 37 ml NB kaplama ortamı eklenmeden önce çiplerin 40 °C'de 2 dakika inkübe edilmesiyle hücrelerin dizilere bağlanmasına izin verildi. NB kaplama ortamı, 50 ml at serumu (HyClone), 1.25 ml glutamax (Invitrogen) ve 10 ml B-27 (Invitrogen)'in 450 ml Neurobasal'a (Gibco) eklenmesiyle hazırlandı. HD-MEA çipleri, 37 °C'de ve %5 COXNUMX'de bir hücre kültürü kuluçka makinesinin içinde tutuldu₂. 3 gün sonra hücreler, her 20 günde bir kültür ortamının %50'sinin taze NB kaplama ortamı ile değiştirilmesiyle DIV 3'ye kadar serumsuz NB kaplama ortamında kültürlendi. Şekil XNUMX'de gösterilen veriler dışındaki tüm deneyler. 1iHücreler büyürken farklı mekanik özellikler gösterdiği için DIV 14 ve 16 arasında yapıldı.¹¹. Şekil 2'de gösterilen verilere yönelik deneyler. 1i nöronal ağların senkronize patlama aktivitesi gösterdiği DIV 22 ve 24 arasında toplandı.

Beyincik dilim hazırlığı

Yabani tip farelerin (doğum sonrası 14. gün C57BL/6Rj, Janvier Labs) izofluran anestezisi altında başları kesildi; beyinleri çıkarıldı ve buz gibi soğuk karbojen kabarcıklı (%95 O) içine daldırıldı₂ +%5 CO₂) yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) çözeltisi. Sagittal serebellar dilimler -Bir vibratom (VT350S, Leica) kullanılarak 1200 um elde edildi. Tüm dilimler kullanıma kadar aCSF'de oda sıcaklığında tutuldu. ACSF, 125 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 2 mM CaClXNUMX'den oluşmuştur.₂, 1 mM MgCl₂, 25 mM glikoz, 1.25 mM NaH₂PO₄ ve 25 mM NaHCO₃. HD-MEA çiplerinin elektrot dizisi daha sonra oda sıcaklığında 10 dakika boyunca borat tamponu (Thermo Fisher Scientific) içindeki 0.05 ul %40 (h/h) poli(etilenimin) (Sigma-Aldrich) ile işlendi ve deiyonize su ile yıkandı. su, ardından 8 ul 0.02 mg ml ile inkübasyon^-1 Laminin (Sigma-Aldrich) Neurobasal ortamda (Gibco) 30 °C'de 37 dakika süreyle. İnkübasyondan sonra fazla laminin pipetle çıkarıldı ve dizinin kurumasına izin verildi. Daha sonra serebellar dilim, pipetleme sırasında kesme kuvvetlerinin neden olduğu hasarı önlemek için kesilmiş bir pipet ucu kullanılarak elektrot dizisine yavaşça yerleştirildi (Ek Şekil XNUMX). 13). Doku dilimini hareketsiz hale getirmek için doku diliminin üzerine 2 mm'lik özel yapım arp yerleştirildi. Doku dilimleri daha sonra damla damla yavaşça eklenerek aCSF'ye daldırıldı. ACSF'ye batırılan hareketsizleştirilmiş doku diliminin daha sonra 30 dakika boyunca elektrot dizisine yapışmasına izin verildi. Kayıttan hemen önce arp çıkarıldı ve AFM kafası HD-MEA çipine takıldı. Hücre canlılığını ve aktivitesini korumak için doku sürekli olarak karbojen kabarcıklı aCSF ile perfüze edildi.

HD-MEA kurulumu

26,400 × 17.5 mm genel algılama alanı içerisinde 3.85 elektrot (2.10 µm aralık) içeren tamamlayıcı metal oksit yarı iletken (CMOS) tabanlı HD-MEA çipleri² kullanılmış²⁵. Talaşlar ticari bir dökümhanede üretildi ve sonradan işlendi ve şirket içinde paketlendi (Ek Şekil 1). 1b). Çiplerin üzerine 4 cm çapında şeffaf polikarbonat halkalar (GB Plex) yapıştırıldı ve tel bağlar biyouyumlu koyu epoksi (EPO-TEK 353 ND) ile kapsüllendi. Elektrotların platin-siyah kaplaması, elektrot empedansını azaltmak ve sinyal-gürültü özelliklerini geliştirmek için elektro-biriktirildi (Ek Şekil XNUMX). 1c). Özel olarak geliştirdiğimiz HD-MEA sistemimizin ticari versiyonları (MaxOne modeli) MaxWell Biosystems'den satın alınabilir.

Numune tutucu ve sahne ısıtıcısı

Kapalı döngü geri bildirimi için bir sıcaklık probuna sahip termoelektrik Peltier tabanlı bir numune ısıtıcısı, numuneyi 37 °C'de tutmak için ev yapımı bir sıcaklık kontrol cihazı tarafından kontrol edildi. Numune ısıtıcısı, HD-MEA çipindeki termal iletim yastığıyla hizalandı. Çipler daha sonra bir numune tutucuya monte edildi ve tutucunun yaylı pimi ile yerine kilitlendi. Örnek tutucuya takılan perfüzyon kurulumu için tutumlu şırınga tutucularını 3D olarak yazdırmak için Prusa I3 MK3S+ kullanıldı. Tüm kurulum özel yapım bir üzerine monte edildi x,y bir taban plakası aracılığıyla piezo kademesi.

x,y piezo sahne

1 nm kodlayıcı çözünürlüğüne sahip iki doğrusal piezo aşaması (Xeryon XLS-5 serisi) birbirine dik olarak bağlanmıştır (Ek Şekil XNUMX). 1a). Doğrusal aşamalar, LabVIEW tabanlı bir kullanıcı arayüzüne bağlı bir Xeryon XD-M çok eksenli kontrol cihazı tarafından kontrol edildi. HD-MEA çipinin sol üst elektrodu, koordinat sisteminin orijini olarak kaydedildi ve ilgili nöronlarla elektrot koordinatları, MaxWell Biosystems kullanıcı arayüzünden çıkarıldı. Bu koordinatlar daha sonra nöronların AFM konsolu altında kolayca konumlandırılması için özel komut dosyaları kullanılarak XD-M denetleyicisine beslendi.

Uzun çalışma mesafeli floresan mikroskobu

25x ayarlanabilir yakınlaştırma lenslerine ve 15.75x objektife (Nikon, MNH1 P55100-SHR PlanApo 2X; sayısal açıklık, 1) sahip bir optik mikroskop (Nikon SMZ 0.156), ana metinde belirtildiği gibi kurulumla hizalandı. TTL ile kontrol edilebilen ışık yayan diyot (LED) aydınlatıcı (CoolLED PE 300)^ultra) uyarma/emisyon filtresiz görüntüleme için ışık kaynağı olarak kullanıldı. HD-MEA çipinden yansıyan uyarım ışığını filtrelemek için üçlü bant geçiren ışın ayırıcı (F66-412, AHF Analysentechnik) kullanıldı. 2 × 4,908 piksele (piksel boyutu, 3,264 × 7.3 µm) sahip büyük bir CMOS dizili kamera (Nikon DS-QI7.3)²), son büyütmeyle 2.5 fps'ye kadar örneklemeye izin veren 45 × f monteli projektör merceği kullanılarak mikroskoba monte edildi -40× ve piksel başına 0.46 µm çözünürlük.

AFM

Ana metinde belirtildiği gibi bir AFM kafası (Catalyst, Bruker) monte edildi ve kurulumla hizalandı. Tüm kuvvet-yer değiştirme ve kuvvet-zaman eğrilerini toplamak için kafadaki 15 µm'lik bir piezo tarayıcı kullanılırken, konsolu nöron üzerinde konumlandırmak için 150 µm'lik bir piezo kullanıldı. Veriler AFM yazılımı (Nanscope v.9.2, Bruker) kullanılarak toplandı ve .txt dosyalarına aktarıldı. Veriler Python komut dosyalarıyla analiz edildi ve çizildi. 5 mikron çapındaki silika boncuklar (Kisker Biotech), uçsuz mikro konsolların (CSC-37 veya 38, Micromash HQ) serbest ucuna ultraviyole yapıştırıcı (Dymax) kullanılarak yapıştırıldı ve 20 dakika boyunca ultraviyole kürlendi. Boncuklu konsollar, bir plazma temizleyici (Harrick Plasma) kullanılarak 5 dakika süreyle temizlendi, ardından 2 mm safir pencereli sıvı sondası tutucusuna monte edildi ve termal gürültü yöntemi kullanılarak kalibre edildi⁴⁸.

İlişkili AFM, HD-MEA ve optik mikroskopi

AFM, HD-MEA ve optik mikroskop gösterildiği gibi hizalandı (Şekil 1). 1a). HD-MEA çipleri üzerindeki nöronlardan gelen floresans ışığı, AFM konsol tutucusundaki safir bir pencere aracılığıyla toplandı ve optik mikroskoba aktarıldı. HD-MEA çipindeki nöronların floresans görüntüsü, ilgilenilen bölgelerde sırayla toplandı, dikildi ve HD-MEA çipindeki nöronları lokalize etmek için Maxwell MEA kullanıcı arayüzüne kaydedildi (Ek Şekil 1). 2a-d.) x,y ilgilenilen nöronların koordinatları daha sonra x,y LabVIEW komut dosyaları aracılığıyla aşamalandırılır, böylece AFM konsolu istenilen pozisyonlara yerleştirilir. -5 nm hassasiyet. Tüm kurulum sönümleyici izolasyonlu bir masaya kuruldu ve mekanik gürültüyü ve termal kaymayı azaltmak için gürültü korumalı, sıcaklık kontrollü bir odaya yerleştirildi.

TTL senkronizasyonu

DS-Qi2'den gelen TTL darbeleri, 3.5 inç dört kutuplu pin, bir tarafında mini fiş ve diğer tarafında dişi 24 AWG atlama kablosu (RND 255-00015, Distrelec) bulunan ev yapımı bir konektör kullanılarak çıkarıldı. Pim 1 topraktı ve pim 4 (EXP_TMG), ayarlanan pozlama süresine göre canlı çalışmada HI (yüksek) seviyede 2.4 V aldı. AFM denetleyicisinin (Bruker Nanscope V) ön panel çıkış kanalı 0'den, bir tarafında standart BNC erkek pimi ve dişi 5 AWG atlama teli (RND 1) bulunan ev yapımı bir konektör aracılığıyla 24-255 V'luk negatif bir darbe çıkarıldı. -00015, Distrelec) diğer tarafta. Hem kameradan hem de AFM'den alınan sinyaller daha sonra tek bir yüksek hızlı optokuplörün 2 ve 8 numaralı pinlerine yönlendirildi. Sinyaller daha sonra sahada programlanabilir bir kapı dizisi aracılığıyla HD-MEA veri toplama sistemine gönderilerek, 20 kHz'de toplanan HD-MEA verilerinin ham dosya kayıtları üzerinde AFM ve optik mikroskopi tarafından tespit edilen olayların kesin zaman damgaları sağlandı.

Sertlik izleme protokolü ve ölçümleri

Görünür Young modülü, nöronal soma üzerinde toplanan ortalama beş kuvvet-yer değiştirme eğrisinden hesaplandı. Daha sonra nöronlarda ölçüme bağlı mekanik değişiklik olmadığından emin olmak için 30 saniye bekledik ve tekrar beş kuvvet-yer değiştirme eğrisi topladık (Şekil XNUMX). 2a), bir ölçüm döngüsü olarak etiketlediğimiz ve bir noktayla temsil edilen (Şekil 1). 2b). Bu ölçüm döngüsünü bir nöron üzerinde 5 dakikaya kadar tekrarladık ve ağdaki bir sonraki nörona geçtik. İlk nörondaki ilk ölçümden XNUMX dakika sonra aynı nörona geri döndük ve ölçüm döngüsü tekrarlandı. Ölçümler uzun süreli ölçekli bir izleme döngüsünden oluşuyordu. Bu uzun süreli ölçekli izleme döngüsü üç kez tekrarlandı (Şekil XNUMX). 2c). Nöritlerin sertlik ölçümleri için, önce nöronların elektrofizyolojik aktivitesini 5 dakika boyunca kaydettik ve ardından nöron başına iki iyi izole edilmiş nörit belirledik ve bunlar üzerinde kuvvet-yer değiştirme eğrileri topladık. Kuvvet-yer değiştirme eğrileri, CSC-38 mikro konsollar (nominal yay sabiti, -0.02 Nm^-1) yukarıda belirtildiği gibi 5 mikron çaplı boncuklar içerir. Kuvvet-mesafe eğrilerini toplamak için somalar üzerinde maksimum 700 pN ve nöritler üzerinde 400 pN'lik bir kuvvet kullanıldı (Ek Şekil XNUMX). 14a,b). Tüm ölçümler için uç hızı 10 µm·s'de sabit tutuldu^-1. Temas noktası yaklaşma kuvveti-yer değiştirme eğrisinden şu şekilde belirlendi: x Temel gürültünün standart sapmasından beş kat daha yüksek bir kuvvet değerinde müdahale ve ardından manuel iyileştirme. Girinti derinliği, konsol sapması çıkarıldıktan ve kuvvet-yer değiştirme eğrisinde maksimum kuvvetteki yer değiştirme değerini sıfıra ayarladıktan sonra temas noktasındaki yer değiştirme değeri olarak hesaplandı (Ek Şekil 1). 14c). Verilen aynı maksimum kuvvet için girinti derinliği, sertliğine bağlı olarak somadan somaya değişecektir. Bu nedenle girinti derinliği sınırını 750 nm olarak belirledik. Kuvvet-yer değiştirme eğrilerinde, karşılık gelen yer değiştirme değerinin girinti derinliği sınırını aşan tüm kuvvet değerleri atıldı. Görünür Young modülü, elastik yarı uzaya sahip küresel bir girinti için Hertz modelinin geçerli olduğu eğrilerden hesaplandı.⁴⁹ Python'da özel kodlar kullanılarak takıldı.

Çalışmamızda nöronların soması için ölçülen Young modülü değerleri önceki raporlarla karşılaştırılabilir bir aralıktadır.^10,11. Bununla birlikte, nöritlerin Young modülü rapor edilen değerlerden daha düşüktür, ancak yine de karşılaştırılabilir bir büyüklük düzeyindedirler. Bu önyargı, nöronun tipik olarak daha yumuşak olan en kalın iki bazal nöritini ölçme tercihimizden kaynaklanabilir. Patlama ve IBI'ler sırasında nöronal somaların sertliğini ölçmek için 5 Hz frekansında kuvvet-yer değiştirme eğrileri topladık. Bu işlem her soma için birkaç kez tekrarlandı ve patlama dönemleri ve IBI'ler sırasında somanın ortalama sertliği hesaplandı. Patlamalar genellikle ritmik bir düzende görünürken (Şek. 2h), tek bir nöronun patlamaya uğradığını kültürlenmiş nöronlar için tahmin etmek zordur. Patlama dönemleri veya IBI'ler sırasında en az iki kuvvet-yer değiştirme eğrisi toplamak için, sondanın nöronla temas etme sayısını en aza indirirken, nöronu 5 kez s girintili hale getirdik.^-1.

Statik sıkıştırma protokolü

Uçsuz bir AFM mikro konsoluna (CSC-5; nominal yay sabiti, -0.8 Nm^-1), somanın üzerinde konumlandırılmıştı. Boncuk, 0.1 kPa veya 5 kPa uygulamak için gereken ayar noktası kuvvetine ulaşılıncaya kadar soma üzerine indirildi ve boncuk geri çekilmeden önce sabit yükseklikte geri bildirim kullanılarak 60 saniye boyunca temas halinde tutuldu (Şekil XNUMX). 5b). 500 kHz örnekleme hızında kaydedilen kuvvet-zaman eğrisi, hem AFM kafasının dikey yer değiştirmesini hem de somanın kuvvet tepkisini gösterir. Sıçan kortikal nöronlarının ortalama soma yüksekliği -8 µm (Ek Şekil. 11a).

Fonksiyonel kalsiyum görüntüleme

Genetik olarak kodlanmış kalsiyum sensörleri, adeno-ilişkili virüsler (AAV'ler) kullanılarak nöronlarda ifade edildi. AAV1-EF1a-GCaMP6'lar (1.8 × 10¹³ viral genomlar ml^-1) 5.0 x 10 enfeksiyonda kullanıldı⁴ GCaMP6'ları ifade etmek için. Nöronlar DIV 3'te enfekte oldu; ifade genellikle DIV 5-9'da görüldü.

Mekanik olarak uyarılmış nöronların fonksiyonel kalsiyum görüntüleme analizi

Ortalama bir floresans yoğunluk eğrisi ΔI/I GCaMP6s eğrisinin maksimum değeri, görüntünün taban çizgisine göre tüm görüntü üzerindeki ortalama sinyal olarak hesaplandı. Sinyaldeki tepe tespiti, 3 saniyelik bir pencere içinde yerel maksimumlar bulunarak gerçekleştirildi. Kalsiyum sinyali genliği zirve değerinin %10'una ulaştığında bir olay, nöronal tepkinin başlangıcı olarak işaretlendi. Yanıt zirvesinin başlangıcından 2.5 saniye öncesine ve 10 saniye sonrasına ait veriler (t = 0) grafiği çizildi.

HD-MEA kayıtları

Verileri kaydetmek için MaxWell Biosystem kullanıcı arayüzü (MaxLab Live v.22.13) kullanıldı. Tüm çip floresans görüntüsü kullanıcı arayüzüne kaydedildi (Ek Şekil XNUMX). 2c). İlgili nöronlar, kalsiyum artışlarından belirlendi ve artış aktivitesi (aksiyon potansiyelleri), kullanıcı arayüzündeki canlı tarama grafiklerinden elde edildi. İlgilenilen bir nöron tanımlandığında, bu nöronun etrafında dikdörtgen bir konfigürasyonda 512 elektrot okumaya yönlendirildi. AFM konsolunun nöron üzerine konumlandırılmasından sonra, kayda başlamadan önce konsol sapmasını tespit etmek için AFM tarafından kullanılan kızılötesi lazerden gelen gürültüyü telafi etmek için kanallar beş kez kaydırıldı. Tüm kayıtlar için 512'lik bir kazanç ve 300 Hz'de kesmeli bir yüksek geçiş filtresi kullanıldı. Şekil XNUMX'deki başak sıralama algoritmalarının performansını artırmak için. 5, nöronal aksiyon potansiyelleri, mekanik stimülasyondan 2.5 dakika önce ve sonra kaydedildi.

HD-MEA veri analizi

Toplanan tüm HD-MEA verileri Spikeinterface'i temel alan özel komut dosyaları aracılığıyla işlendi⁵⁰. Kısaca, hücre dışı kayıtlar Kilosort2 kullanılarak filtrelendi ve başaklara göre sıralandı, ardından tüm kayıtlar manuel olarak düzenlendi. İyileştirme için 0.5'lik koruyucu bir ani artış aralığı ihlali eşiği ve 5.0'lık bir sinyal-gürültü oranı eşiği kullanıldı. Birim kalite değerlendirmesi için şablon benzerliği, oto-korelogramlar ve çapraz-korelogramlar kullanıldı. Yarı genişlik ve repolarizasyon eğimi gibi dalga biçimi özellikleri, Spikeinterface'in işlevlerini kullanarak Python komut dosyalarıyla ilgili dönemler için başak sıralı birimler için çıkarıldı (Ek Şekil XNUMX). 12a–i). Bir nöronun hücre dışı ayak izi içindeki tüm elektrotlardaki dalga biçimi özelliklerindeki göreceli değişiklikler, mekanik sıkıştırma sırasındaki tüm sivri uçların ortalama dalga biçimi özelliğinin değerinin, sıkıştırmadan önceki tüm sivri uçların ortalama dalga biçimi özelliğine bölünmesiyle elde edildi. Ortalama ateşleme hızı ve sivri uçlar arası aralık, Elephant elektrofizyoloji analiz araç seti 0.11.2 kullanılarak çıkarılan sivri uç dizilerinden hesaplandı.⁵¹. Sertlik korelasyon verileri için ortalama ateşleme oranları, sivri uçların sertlik değerlerinin zaman noktalarıyla eşleşecek şekilde 30 saniyelik kutulara yerleştirilmesiyle hesaplandı. Sıkıştırma protokolü için ortalama ateşleme hızları, sıkıştırma öncesinde, sırasında ve sonrasında üç bölmeye sivri uçlar yerleştirilerek hesaplandı.

Kombine AFM ve konfokal mikroskopi

Hızlandırılmış eş odaklı görüntüleme, 1x/700 LCI PlanApo suya daldırma hedefi (Zeiss) ile donatılmış ters lazer taramalı eş odaklı bir mikroskopta (Observer Z25, LSM 0.8; Zeiss) gerçekleştirildi. Konfokal mikroskop üzerine bir AFM (CellHesion 200; JPK Instruments) monte edildi. Mekanik sıkıştırma protokolleri JPK CellHesion yazılımı kullanılarak yürütüldü. Mekanik stimülasyon için AFM, konsola boncukla hücrenin üzerine 0.1, 1, 10 veya 100 μm s hızlarda yaklaşmak için kullanıldı.^-1 ayar noktası kuvvetine ulaşana kadar ve ardından yaklaşma için kullanılanla aynı hızla hemen geri çekilir. Nöronları mekanik olarak uyarmak için eşik kuvvetini belirleyen deneyler için, uygulanan ayar noktası kuvveti, 50 nN'lik artışlarla ve 400 saniyelik aralıklarla adım adım 50'den 20 nN'ye çıkarıldı (Ek Şekil XNUMX). 6). Yaklaşan boncuğun ayar noktası kuvveti, nöronal bir yanıt kaydedilene kadar adım adım artırıldı. Nöronun başarılı bir şekilde uyarılmasının ardından konsol geri çekildi ve uyarılma için yeni bir nöron seçildi.

istatistiksel analiz

Dalga biçimi özelliklerini gösteren tüm veriler Shapiro-Wilk testiyle normallik açısından test edildi ve Q-Q araziler. Tüm veri grupları normal şekilde dağılmadı ve bağımlı veri gruplarıydı. Bu nedenle Wilcoxon işaretli sıra testini kullandık. Boş hipotez, ikili olarak karşılaştırılan dağılımlar arasında medyanlarda hiçbir fark olmadığı yönündeydi. P 0.05'in üzerindeki değerler anlamsız kabul edildi. Dalga biçimi özellikleri, elde edilen her bir nöronun ortalama dalga biçiminden çıkarıldı. n > 5,000 ani artış. Ortalama ateşleme oranlarını gösteren tüm veriler Wilcoxon işaretli sıra testiyle karşılaştırıldı. n > 10,000 ani artış. AFM veri grupları, iki kuyruklu Mann-Whitney kullanılarak karşılaştırıldı U-Ölçek. P Her karşılaştırmanın değerleri şekil açıklamalarında belirtilmiştir. Sertlik ve ortalama ateşleme hızı değerlerindeki doğrusal korelasyonları belirlemek için Pearson korelasyonu kullanıldı. Örneklem büyüklüklerini önceden belirlemek için hiçbir istatistiksel yöntem kullanılmadı. Veri toplama ve analiz, deneylerin koşullarına bakılmaksızın gerçekleştirilmedi.

Raporlama özeti

Araştırma tasarımı hakkında daha fazla bilgi Doğa Portföyü Raporlama Özeti bu makaleye bağlantılı.

• SEO Destekli İçerik ve Halkla İlişkiler Dağıtımı. Bugün Gücünüzü Artırın.
• PlatoData.Network Dikey Üretken Yapay Zeka. Kendine güç ver. Buradan Erişin.
• PlatoAiStream. Web3 Zekası. Bilgi Genişletildi. Buradan Erişin.
• PlatoESG. karbon, temiz teknoloji, Enerji, Çevre, Güneş, Atık Yönetimi. Buradan Erişin.
• PlatoSağlık. Biyoteknoloji ve Klinik Araştırmalar Zekası. Buradan Erişin.
• Kaynak: https://www.nature.com/articles/s41565-024-01609-1