Primaarisen neuroniviljelmän valmistelu

Kanton Basel-Stadtin eläinlääkintätoimisto hyväksyi koeprotokollat, joihin sisältyi eläinkudosten kerääminen Sveitsin liittovaltion eläinten hyvinvointia koskevien lakien mukaisesti, ja ne suoritettiin hyväksyttyjen ohjeiden mukaisesti. HD-MEA-sirut tai lasipeitelasit steriloitiin 70-prosenttisessa etanolissa 60 minuutin ajan ja pestiin steriilillä deionisoidulla vedellä laminaarisen ilmavirran alla. Elektrodiryhmä tai peitinlasit käsiteltiin sitten 10 µl:lla 0.05 % (v/v) poly(etyleeni-imiiniä) (Sigma-Aldrich) boraattipuskurissa (Thermo Fisher Scientific) 40 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja pestiin deionisoidulla vedellä. inkuboimalla 8 ul:n kanssa 0.02 mg ml^-1 laminiinia (Sigma-Aldrich) neurobasaalisessa (NB) alustassa (Gibco) 30 minuutin ajan 37 °C:ssa. E-18 Wistar -rotan alkiot leikattiin jääkylmässä HBSS:ssä (Gibco) niiden aivokuoren keräämiseksi, jotka sitten dissosioitiin 0.25 % trypsiini-EDTA:ssa (Gibco). Dissosioituneet aivokuoren solut hierrettiin varovasti ja suodatettiin 0.45 um:n seulan läpi yksittäisten solujen saamiseksi. Solutiheys arvioitiin ja 10 µl 3,000 XNUMX solua µl^-1 liuos pinnoitettiin elektrodiryhmälle. Solujen annettiin kiinnittyä ryhmiin inkuboimalla siruja 37 °C:ssa 40 minuuttia ennen kuin lisättiin 2 ml NB-maljausalustaa. NB-maljauselatusaine valmistettiin lisäämällä 50 ml hevosen seerumia (HyClone), 1.25 ml glutamaxia (Invitrogen) ja 10 ml B-27 (Invitrogen) 450 ml:aan Neurobasalia (Gibco). HD-MEA-siruja pidettiin soluviljelyinkubaattorissa 37 °C:ssa ja 5 % CO:ssa₂. 3 päivän kuluttua soluja viljeltiin seerumittomassa NB-maljausalustassa DIV 20 asti vaihtamalla 50 % elatusaineesta tuoreeseen NB-maljausväliaineeseen kerran 3 päivässä. Kaikki kokeet, lukuun ottamatta kuvassa esitettyjä tietoja. 1i, suoritettiin DIV 14 ja 16 välillä, koska solut osoittivat erilaisia ​​mekaanisia ominaisuuksia kasvaessaan¹¹. Kokeet kuvassa näytettyjen tietojen osalta. 1i kerättiin DIV 22 ja 24 välillä, jolloin hermosolujen verkot osoittivat synkronista purkausaktiivisuutta.

Pikkuaivoviipaleiden valmistus

Villityypin hiiret (postnataalinen päivä 14 C57BL/6Rj, Janvier Labs) leikattiin isofluraanianestesiassa; heidän aivonsa poistettiin ja upotettiin jääkylmään hiilikuplilla (95 % O₂ + 5 % CO₂) keinotekoinen aivo-selkäydinneste (aCSF) -liuos. Sagittaaliset pikkuaivoviipaleet ~350 um saatiin käyttämällä vibratomia (VT1200S, Leica). Kaikki viipaleet pidettiin huoneenlämmössä aCSF:ssä käyttöön asti. aCSF koostui 125 mM NaCl:sta, 2.5 mM KCl:sta, 2 mM CaCl:sta₂, 1 mM MgCl₂25 mM glukoosia, 1.25 mM NaH₂PO₄ ja 25 mM NaHCXNUMX:ta₃. HD-MEA-sirujen elektrodiryhmää käsiteltiin sitten 10 µl:lla 0.05 % (v/v) poly(etyleeni-imiiniä) (Sigma-Aldrich) boraattipuskurissa (Thermo Fisher Scientific) 40 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja pestiin deionisoidulla. vedellä, jota seurasi inkubointi 8 µl:n kanssa 0.02 mg ml^-1 laminiinia (Sigma-Aldrich) Neurobasal-elatusaineessa (Gibco) 30 minuutin ajan 37 °C:ssa. Ylimääräinen laminiini pipetoitiin inkubaation jälkeen ja ryhmän annettiin kuivua. Pikkuaivoviipale asetettiin sitten varovasti elektrodiryhmälle leikatulla pipetin kärjellä, jotta vältytään pipetoinnin aikana aiheuttavilta leikkausvoimilla (lisäkuva XNUMX). 13). Kudosviipaleelle asetettiin 2 mm mittatilaustyönä valmistettu harppu kudosviipaleen immobilisoimiseksi. Kudosviipaleet upotettiin sitten aCSF:ään lisäämällä varovasti tipoittain. Immobilisoidun kudosviipaleen, joka oli upotettu aCSF:ään, annettiin sitten tarttua elektrodiryhmään 30 minuutin ajan. Juuri ennen äänitystä harppu poistettiin ja AFM-pää kiinnitettiin HD-MEA-sirun päälle. Kudokseen perfusoitiin jatkuvasti hiilikuplia sisältävällä aCSF:llä solujen elinkelpoisuuden ja aktiivisuuden ylläpitämiseksi.

HD-MEA-asetukset

Komplementtimetallioksidipuolijohde (CMOS) -pohjaiset HD-MEA-sirut, joissa on 26,400 17.5 elektrodia (3.85 µm:n jako) 2.10 × XNUMX mm:n havaintoalueella² käytettiin²⁵. Sirut valmistettiin kaupallisessa valimossa ja jälkikäsiteltiin ja pakattiin talossa (lisäkuva 1). 1b). Lastuille liimattiin läpinäkyviä polykarbonaattirenkaita (GB Plex), joiden halkaisija oli 4 cm, ja lankasidokset kapseloitiin bioyhteensopivalla tummalla epoksilla (EPO-TEK 353 ND). Elektrodien platinamusta pinnoite sähkösaostettiin elektrodin impedanssin pienentämiseksi ja signaali-kohina-ominaisuuksien parantamiseksi (lisäkuva XNUMX). 1c). Räätälöidyn HD-MEA-järjestelmämme kaupallisia versioita voi ostaa (MaxOne-malli) MaxWell Biosystemsiltä.

Näytepidike ja lavalämmitin

Lämpösähköistä Peltier-pohjaista näytteenlämmitintä, jossa oli lämpötila-anturi suljetun silmukan takaisinkytkentää varten, ohjattiin kotona rakennetulla lämpötilansäätimellä näytteen pitämiseksi 37 °C:ssa. Näytteenlämmitin kohdistettiin HD-MEA-sirun lämmönjohtavuustyynyn kanssa. Sirut kiinnitettiin sitten näytepidikkeeseen ja lukittiin paikalleen pidikkeen jousikuormitteisella tapilla. Prusa I3 MK3S+:a käytettiin 3D-tulostukseen perfuusiolaitteiston säästeliäät ruiskupidikkeet, jotka kiinnitettiin näytetelineeseen. Koko kokoonpano asennettiin mittatilaustyönä tehdylle x,y piezo-vaihe pohjalevyn kautta.

x,y piezo-vaihe

Kaksi lineaarista pietsoastetta (Xeryon XLS-1 -sarja), joiden kooderin resoluutio oli 5 nm, kiinnitettiin toisiinsa kohtisuorasti (lisäkuva XNUMX). 1a). Lineaarisia vaiheita ohjattiin Xeryon XD-M -moniakseliohjaimella, joka oli kytketty LabVIEW-pohjaiseen käyttöliittymään. HD-MEA-sirun vasen yläelektrodi rekisteröitiin koordinaattijärjestelmän origoksi, ja elektrodikoordinaatit kiinnostavien neuronien kanssa poimittiin MaxWell Biosystemsin käyttöliittymästä. Nämä koordinaatit syötettiin sitten XD-M-ohjaimeen käyttämällä mukautettuja skriptejä hermosolujen helpottamiseksi AFM-ulokkeen alle.

Pitkän työskentelyetäisyyden fluoresenssimikroskopia

Optinen mikroskooppi (Nikon SMZ 25), jossa on 15.75-kertaiset säädettävät zoomausobjektiivit ja 1-kertainen objektiivi (Nikon, MNH55100 P2-SHR PlanApo 1X; numeerinen aukko, 0.156), kohdistettiin päätekstissä mainittuun kokoonpanoon. TTL-ohjattava valodiodi (LED) -valaisin (CoolLED PE 300^ultra) käytettiin valonlähteenä viritys-/emissiosuodattimettomassa kuvantamisessa. Kolminkertaista kaistanpäästösäteen jakajaa (F66-412, AHF Analysentechnik) käytettiin HD-MEA-sirun heijastuneen viritysvalon suodattamiseen. Suuri CMOS-järjestelmäkamera (Nikon DS-QI2), jossa on 4,908 3,264 × 7.3 7.3 pikseliä (pikselin koko, XNUMX × XNUMX µm²) kiinnitettiin mikroskooppiin käyttämällä 2.5× f-kiinnitettyä projektorin linssiä, joka mahdollisti näytteenoton jopa 45 fps:llä lopullisella suurennuksella ~40× ja resoluutio 0.46 µm pikseliä kohden.

AFM

AFM-pää (Catalyst, Bruker) asennettiin ja kohdistettiin päätekstissä mainittuun kokoonpanoon. Päässä olevaa 15 µm:n pietsoskanneria käytettiin keräämään kaikki voima-siirtymä- ja voima-aikakäyrät, kun taas 150 µm:n pietsoskanneria käytettiin ulokkeen sijoittamiseen neuronille. Tiedot kerättiin ja vietiin .txt-tiedostoihin AFM-ohjelmistolla (Nanoscope v.9.2, Bruker). Tiedot analysoitiin ja piirrettiin Python-skripteillä. Piidioksidihelmet, joiden halkaisija oli 5 μm (Kisker Biotech), liimattiin kärjettömien mikroulokkeiden (CSC-37 tai 38, Micromash HQ) vapaaseen päähän ultraviolettiliimalla (Dymax) ja kovetettiin ultraviolettisäteilyssä 20 minuuttia. Helmillä varustetut ulokkeet puhdistettiin 5 minuutin ajan plasmapuhdistimella (Harrick Plasma), kiinnitettiin sitten nesteanturin pidikkeeseen 2 mm:n safiiriikkunalla ja kalibroitiin lämpökohinamenetelmällä.⁴⁸.

Korrelatiivinen AFM, HD-MEA ja optinen mikroskopia

AFM, HD-MEA ja optinen mikroskooppi kohdistettiin kuvan mukaisesti (kuva 1). 1a). HD-MEA-sirujen hermosolujen fluoresenssivalo kerättiin AFM-ulokepidikkeen safiiri-ikkunan läpi ja ohjattiin optiseen mikroskooppiin. HD-MEA-sirun hermosolujen fluoresenssikuvat kerättiin peräkkäin kiinnostavilta alueilta, ommeltiin ja rekisteröitiin Maxwell MEA -käyttöliittymään hermosolujen paikallistamiseksi HD-MEA-sirulle (täydentävä kuva 1). 2a-d). x,y kiinnostavien neuronien koordinaatit syötettiin sitten x,y vaiheessa LabVIEW-skriptien kautta, jolloin AFM-uloke asetetaan haluttuihin paikkoihin ~5 nm:n tarkkuus. Koko laitteisto asennettiin vaimennuseristetylle pöydälle ja sijoitettiin melulta suojattuun, lämpötilasäädeltyyn kammioon mekaanisen melun ja lämpöpoikkeaman vähentämiseksi.

TTL-synkronointi

TTL-pulssit DS-Qi2:sta erotettiin käyttämällä kotitekoista liitintä, jossa oli 3.5 tuuman nelinapainen nasta, minipistoke toisella puolella ja naaraspuolinen 24 AWG -hyppyjohdin (RND 255-00015, Distrelec) toisella puolella. Nasta 1 oli maadoitus ja nasta 4 (EXP_TMG) sai 2.4 V HI (korkea) -tasolla jännitteisessä käytössä asetetun valotusajan mukaisesti. AFM-ohjaimen (Bruker Nanoscope V) etupaneelin lähtökanavasta 0 poistettiin negatiivinen pulssi 5–1 V kotitekoisen liittimen kautta, jonka toisella puolella on tavallinen BNC-urosnasta ja naaraspuolinen 24 AWG -hyppyjohdin (RND 255). -00015, Distrelec) toisella puolella. Sekä kamerasta että AFM:stä poimitut signaalit reititettiin sitten yhden nopean optoerottimen nastoihin 2 ja 8. Signaalit lähetettiin sitten HD-MEA-tiedonhankintajärjestelmään kentällä ohjelmoitavan portin kautta, mikä tarjosi tarkat aikaleimat AFM:n ja optisen mikroskopian havaitsemista tapahtumista 20 kHz:n taajuudella kerättyjen HD-MEA-tietojen raakatiedostojen tallennuksissa.

Jäykkyyden seurantaprotokolla ja mittaukset

Näennäinen Youngin moduuli laskettiin keskiarvosta viidestä voima-siirtymäkäyrästä, jotka on kerätty hermosoomalle. Odotimme sitten 30 sekuntia varmistaaksemme, että hermosoluissa ei ollut mittausten aiheuttamia mekaanisia muutoksia, ja keräsimme jälleen viisi voima-siirtymäkäyrää (kuva XNUMX). 2a), jonka merkitsimme yhdeksi mittausjaksoksi ja jota edustaa yksi piste (kuva 1). 2b). Toistimme tämän mittausjakson 5 minuuttiin asti neuronilla ja siirryimme verkon seuraavaan neuroniin. Kuusikymmentä minuuttia ensimmäisellä neuronilla tehdyn ensimmäisen mittauksen jälkeen palasimme samaan neuroniin ja mittaussykli toistettiin. Mittaukset käsittivät pitkän mittakaavan seurantasyklin. Tämä pitkän mittakaavan seurantasykli toistettiin kolme kertaa (kuva XNUMX). 2c). Neuriittien jäykkyysmittauksia varten rekisteröimme ensin neuronien sähköfysiologisen aktiivisuuden 5 minuutin ajan ja tunnistimme sitten kaksi hyvin eristettyä neuriittia hermosolua kohden ja keräsimme niille voima-siirtymäkäyrät. Voima-siirtymäkäyrät kerättiin käyttämällä CSC-38-mikroulokkeita (nimellinen jousivakio, ~0.02 Nm^-1), jossa on halkaisijaltaan 5 μm helmiä, kuten edellä mainittiin. Voima-etäisyyskäyrien keräämiseen käytettiin maksimivoimaa 700 pN somaan ja 400 pN neuriiteihin (lisäkuva XNUMX). 14a,b). Kaikissa mittauksissa kärjen nopeus pidettiin vakiona 10 µm s^-1. Kosketuspiste määritettiin lähestymisvoima-siirtymäkäyrästä x sieppaus voiman arvolla, joka oli viisi kertaa suurempi kuin peruskohinan standardipoikkeama, mitä seurasi manuaalinen kurointi. Sisennyssyvyys laskettiin siirtymäarvona kosketuspisteessä sen jälkeen, kun ulokkeen taipuma oli vähennetty ja maksimivoiman siirtymäarvo on asetettu nollaan voima-siirtymäkäyrällä (lisäkuva 1). 14c). Sisennyssyvyys samalla maksimivoimalla vaihtelee somasta somaan riippuen sen jäykkyydestä. Siksi olemme asettaneet sisennyssyvyyden raja-arvoksi 750 nm. Voima-siirtymäkäyrillä kaikki voima-arvot, joiden vastaava siirtymäarvo ylitti sisennyssyvyyden raja-arvon, hylättiin. Näennäinen Youngin moduuli laskettiin sellaisista käyristä, joihin Hertz-malli pallomaiselle sisennykselle, jossa on elastinen puoliavaruus⁴⁹ asennettu käyttämällä mukautettuja koodeja Pythonissa.

The Youngin moduuliarvot, jotka mitattiin tutkimuksessamme hermosolujen somalle, ovat vertailukelpoisella alueella aikaisempien raporttien kanssa^10,11. Neuriittien Youngin moduuli on kuitenkin raportoitua arvoa alhaisempi, vaikka ne ovat edelleen vertailukelpoisessa suuruusluokissa. Tämä harha saattaa johtua valinnastamme mitata hermosolun kaksi paksuinta perusneuriittia, jotka ovat tyypillisesti pehmeämpiä. Olemme keränneet voima-siirtymäkäyrät 5 Hz:n taajuudella neuronaalisten somien jäykkyyden mittaamiseksi purskeen ja IBI:n aikana. Tämä prosessi toistettiin useita kertoja kullekin somalle, ja soman keskimääräinen jäykkyys murtumisjaksojen ja IBI:n aikana laskettiin. Purskeet esiintyvät yleensä rytmisessä kuviossa (kuva XNUMX). 2h), on vaikea ennustaa viljellyille hermosoluille, kun yksittäinen hermosolu murtuu. Keräsimme vähintään kaksi voima-siirtymäkäyrää murtumisjaksojen tai IBI:n aikana ja minimoimme sen, kuinka monta kertaa koetin joutuu kosketuksiin hermosolun kanssa, sisennysimme hermosolun 5 kertaa s.^-1.

Staattinen pakkausprotokolla

Halkaisijaltaan 5 µm helmi, liimattu kärjettömään AFM-mikrokannattimeen (CSC-37; nimellinen jousivakio, ~0.8 Nm^-1), sijoitettiin soman yläpuolelle. Helmi laskettiin somaan, kunnes saavutettiin 0.1 kPa:n tai 5 kPa:n kohdistamiseen vaadittava asetuspistevoima, ja pidettiin kosketuksessa 60 s käyttämällä vakiokorkeuspalautetta ennen helmen sisäänvetämistä (kuva XNUMX). 5b). 500 kHz:n näytteenottotaajuudella tallennettu voima-aikakäyrä näyttää sekä AFM-pään pystysuuntaisen siirtymän että soman voimavasteen. Rotan aivokuoren hermosolujen soman keskimääräinen korkeus oli ~8 µm (lisäkuva). 11a).

Toiminnallinen kalsiumkuvaus

Geneettisesti koodattuja kalsiumantureita ekspressoitiin neuroneissa käyttämällä adeno-assosioituja viruksia (AAV). AAV1-EF1a-GCaMP6s (1.8 × 10¹³ virusgenomit ml^-1) käytettiin useilla infektioilla 5.0 × 10⁴ ilmaisemaan GCaMP6:ita. Neuronit infektoitiin kohdassa DIV 3; ilmentymä nähtiin yleensä kohdissa DIV 5–9.

Mekaanisesti stimuloitujen hermosolujen funktionaalinen kalsiumkuvausanalyysi

Keskimääräinen fluoresenssin intensiteettikäyrä ΔI/I GCaMP6s-käyrä laskettiin keskimääräisenä signaalina koko kuvassa suhteessa kuvan perusviivaan. Huipputunnistaminen signaalissa suoritettiin etsimällä paikalliset maksimit 3 sekunnin ikkunasta. Tapahtuma merkittiin neuronaalisen vasteen alkajaksi, kun kalsiumsignaalin amplitudi saavutti 10 % huippuarvosta. Tiedot 2.5 s ennen vastehuippua ja 10 s sen jälkeen (t = 0) piirrettiin.

HD-MEA-tallenteet

Datan tallentamiseen käytettiin MaxWell Biosystem -käyttöliittymää (MaxLab Live v.22.13). Koko sirun fluoresenssikuva rekisteröitiin käyttöliittymään (lisäkuva XNUMX). 2c). Kiinnostuksen kohteena olevat neuronit tunnistettiin kalsiumpiikkeistä, ja piikkiaktiivisuus (toimintapotentiaalit) saatiin käyttöliittymän elävistä rasterikaavioista. Kun kiinnostava neuroni tunnistettiin, 512 elektrodia tämän neuronin ympärillä suorakaiteen muotoisessa konfiguraatiossa ohjattiin lukemaan. Kun AFM-uloke oli sijoitettu neuronille, kanavat siirrettiin viisi kertaa kompensoimaan AFM:n käyttämän infrapunalaserin aiheuttamaa kohinaa ulokkeen taipuman havaitsemiseen ennen tallennuksen aloittamista. Kaikissa tallennuksissa käytettiin vahvistusta 512 ja ylipäästösuodatinta 300 Hz:n rajalla. Piikkien lajittelualgoritmien suorituskyvyn parantamiseksi kuvassa XNUMX. 5, hermosolujen toimintapotentiaalit rekisteröitiin 2.5 minuuttia ennen mekaanista stimulaatiota ja sen jälkeen.

HD-MEA dataanalyysi

Kaikki kerätyt HD-MEA-tiedot käsiteltiin mukautetuilla skripteillä, jotka perustuivat Spikeinterfaceen⁵⁰. Lyhyesti sanottuna solunulkoiset tallenteet suodatettiin ja lajiteltiin piikkien mukaan käyttämällä Kilosort2:ta, mitä seurasi kaikkien tallenteiden manuaalinen kuratointi. Kurointiin käytettiin konservatiivista piikkien välisen rikkomuksen kynnystä 0.5 ja signaali-kohinasuhteen kynnystä 5.0. Yksikön laadun arvioinnissa käytettiin mallien samankaltaisuutta, autokorrelogrammeja ja ristikorrelogrammeja. Aaltomuodon ominaisuudet, kuten puolileveys ja repolarisaatiokaltevuus, erotettiin vastaavien aikakausien piikkien mukaan lajiteltuja yksiköitä varten Python-skripteillä käyttämällä Spikeinterfacen toimintoja (lisäkuva XNUMX). 12a-i). Suhteelliset muutokset aaltomuodon ominaisuuksissa kaikilla neuronin solunulkoisen jalanjäljen sisällä olevilla elektrodeilla saatiin jakamalla kaikkien piikkien keskimääräisen aaltomuodon ominaisuuden arvo mekaanisen puristuksen aikana kaikkien piikkien keskimääräisellä aaltomuodon ominaisuudella ennen puristusta. Keskimääräinen laukaisunopeus ja piikkien välinen intervalli laskettiin erotetuista piikkisarjoista käyttämällä Elephant electrophysiology analysis toolkit 0.11.2⁵¹. Jäykkyyskorrelaatiotietojen keskimääräiset laukaisunopeudet laskettiin asettamalla piikit 30 s:n säiliöihin vastaamaan jäykkyysarvojen aikapisteitä. Pakkausprotokollan keskimääräiset laukaisunopeudet laskettiin sijoittamalla piikit kolmeen laatikkoon ennen pakkausta, sen aikana ja sen jälkeen.

Yhdistetty AFM ja konfokaalinen mikroskopia

Ajastettu konfokaalinen kuvantaminen suoritettiin käänteisellä laserkeilaavalla konfokaalimikroskoopilla (Observer Z1, LSM 700; Zeiss), joka oli varustettu 25 ×/0.8 LCI PlanApo -vesiimmersioobjektiivilla (Zeiss). AFM (CellHesion 200; JPK Instruments) kiinnitettiin konfokaalimikroskooppiin. Mekaaniset pakkausprotokollat ​​suoritettiin käyttämällä JPK CellHesion -ohjelmistoa. Mekaanista stimulaatiota varten AFM:ää käytettiin lähestymään ulokea helmellä soluun nopeuksilla 0.1, 1, 10 tai 100 μm s.^-1 kunnes saavutetaan asetuspistevoima, ja sen jälkeen vetäytyy välittömästi sisään samalla nopeudella kuin lähestymiseen käytettiin. Kokeissa, joissa määritettiin kynnysvoima hermosolujen mekaanisesti stimuloimiseksi, käytettyä asetusarvoa nostettiin asteittain 50 nN:stä 400 nN:iin 50 nN:n askelin ja 20 sekunnin välein (lisäkuva XNUMX). 6). Lähestyvän helmen asetuspistevoimaa lisättiin asteittain, kunnes hermosolujen vaste rekisteröitiin. Hermosolun onnistuneen stimulaation jälkeen uloke vedettiin sisään ja uusi neuroni valittiin stimulaatiota varten.

Tilastollinen analyysi

Kaikki aaltomuodon ominaisuuksia osoittavat tiedot testattiin normaaliuden suhteen Shapiro-Wilk-testillä ja Q-Q juonit. Kaikki tietoryhmät eivät olleet normaalisti jakautuneita ja olivat riippuvaisia ​​tietoryhmiä. Siksi käytimme Wilcoxon signed-rank -testiä. Nollahypoteesi oli, että pareittain verrattujen jakaumien välillä ei ole eroa mediaaneissa. P arvoja > 0.05 pidettiin ei-merkittävinä. Aaltomuodon ominaisuudet erotettiin kunkin hermosolun keskimääräisestä aaltomuodosta, joka saatiin n > 5,000 piikkiä. Kaikkia tietoja, jotka osoittavat keskimääräiset laukaisunopeudet, verrattiin Wilcoxonin signed-rank-testiin n > 10,000 XNUMX piikkiä. AFM-tietoryhmiä verrattiin käyttämällä kaksisuuntaista Mann-Whitneyä U-testata. P kunkin vertailun arvot mainitaan kuvan selitteissä. Pearson-korrelaatiota käytettiin määrittämään lineaariset korrelaatiot jäykkyyden ja keskimääräisen laukaisunopeuden arvoissa. Mitään tilastollisia menetelmiä ei käytetty otoskoon ennalta määrittämiseen. Tietojen keräämistä ja analysointia ei suoritettu sokeasti kokeiden olosuhteiden suhteen.

Raportointiyhteenveto

Lisätietoja tutkimussuunnittelusta on saatavana Nature Portfolio Reporting Summary linkitetty tähän artikkeliin.

• SEO-pohjainen sisällön ja PR-jakelu. Vahvista jo tänään.
• PlatoData.Network Vertical Generatiivinen Ai. Vahvista itseäsi. Pääsy tästä.
• PlatoAiStream. Web3 Intelligence. Tietoa laajennettu. Pääsy tästä.
• PlatoESG. hiili, CleanTech, energia, ympäristö, Aurinko, Jätehuolto. Pääsy tästä.
• PlatonHealth. Biotekniikan ja kliinisten kokeiden älykkyys. Pääsy tästä.
• Lähde: https://www.nature.com/articles/s41565-024-01609-1